CCK-8試劑盒-高靈敏度檢測(cè)試劑盒

Cell Counting Kit-8簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），適用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。

Figure.1 CCK-8（WST-8）反應(yīng)機(jī)制

實(shí)驗(yàn)原理：

WST-8屬于MTT的升級(jí)產(chǎn)品，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線(xiàn)粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

用途：

CCK-8法應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選、細(xì)胞增  殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、*藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測(cè)等。

為什么將Cell Counting Kit (CCK-8) 作為細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)最佳選擇：

• 如下表，CCK-8法與其他細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)方法的優(yōu)勢(shì)比較，結(jié)果不言而喻！

* 細(xì)胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到最佳測(cè)定時(shí)間

* 酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾（扣除空白孔即可）

如何選擇合適的CCK-8檢測(cè)試劑盒？

目前市面上能提供的【CCK-8】細(xì)胞增殖／毒性檢測(cè)試劑盒有國(guó)產(chǎn)分裝或原產(chǎn)的，國(guó)產(chǎn)分裝的CCK-8試劑盒在質(zhì)量穩(wěn)定性上有不足。而原產(chǎn)于國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室的CCK-8試劑盒有些具有較好的檢測(cè)結(jié)果，在批次之間的穩(wěn)定性上較難控制。至于原裝進(jìn)口供應(yīng)CCK-8試劑盒的進(jìn)口品牌并不多，就連Abcam、Thermo，Sigma等等幾個(gè)品牌都不能夠提供CCK-8試劑盒，而其它品牌在性?xún)r(jià)比上遠(yuǎn)遜于Abbkine產(chǎn)品。

作為Abbkine品牌旗下首款細(xì)胞分析旗艦產(chǎn)品，Cell Counting Kit (CCK-8)，Abbkine研發(fā)工程師為其傾注了大量的投入，不斷摸索優(yōu)化最佳的配方，每一份努力只為讓科研工作者更加簡(jiǎn)單，高效，穩(wěn)定地獲取珍貴的科研數(shù)據(jù)。

本試劑盒檢測(cè)非常便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，無(wú)須再進(jìn)行任何配制等操作 。無(wú)須使用同位素，所有的檢測(cè)步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細(xì)胞，不必收集細(xì)胞，也不必采用額外的步驟去溶解formazan。可以用于大批量樣品的檢測(cè)。

《【CCK-8】細(xì)胞增殖／毒性檢測(cè)試劑盒綜合對(duì)比》

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

• 建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。
• 有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加入CCK-8試劑時(shí)，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基頁(yè)面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會(huì)干擾OD值讀數(shù)。
• 白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
• 當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1,000 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。
• 如果沒(méi)有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測(cè)靈敏度最高。
• 如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話(huà)，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

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CCK-8實(shí)驗(yàn)操作指南：http://www.docin.com/p-1853035994.html

CCK-8常見(jiàn)問(wèn)題匯總：http://www.docin.com/p-1853035993.html

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