原位雜交技術(shù)電話,武漢思特進(jìn)

多彩色熒光原位雜交技術(shù)多彩色熒光原位雜交(Multicolor fluorescence in situ hybridization，mFISH)是在熒光原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新技術(shù)，它用幾種不同顏色的熒光素單獨(dú)或混合標(biāo)記的探針進(jìn)行原位雜交，能同時(shí)檢測(cè)多個(gè)靶位，各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同，呈現(xiàn)多種色彩，因而被稱為多彩色熒光原位雜交。它克服了FISH技術(shù)的局限，能同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因，在檢測(cè)遺傳物質(zhì)的突變和染色體上基因定位等方面得到了廣泛的應(yīng)用(楊明杰等1998)。

原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精3確定量定位的過(guò)程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。

原位雜交技術(shù)(In situ hybridization，ISH)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門(mén)新興技術(shù)，始于20世紀(jì)60年代。

原位PCR；原位雜交細(xì)胞定位和PCR的高靈敏度相結(jié)合的技術(shù)，在細(xì)胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對(duì)靶基因片段進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)摻入標(biāo)記基團(tuán)直接顯色或結(jié)合原位雜交進(jìn)行檢測(cè)的方法。

原位雜交；原位雜交（in situ hybridization）將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交，稱為原位雜交！

使用DNA或者RNA探針來(lái)檢測(cè)與其互補(bǔ)的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置。

以菌落原位雜交為例：對(duì)分散在若干個(gè)瓊脂平板上的少數(shù)菌落（100-200）進(jìn)行克8隆篩選時(shí)，可采用本方法。將這些菌落歸并到一個(gè)瓊脂主平板以及已置于第二個(gè)瓊脂平板表面的一張硝5酸纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時(shí)間后，對(duì)菌落進(jìn)行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。

在選用探針時(shí)經(jīng)常會(huì)受到可利用探針?lè)N類的限制。如在建立DNA文庫(kù)時(shí)，手頭沒(méi)有篩選特定基因的克0隆探針，這時(shí)就可用寡核苷酸探針來(lái)代替。但必須首先純化該基因的編碼蛋白，并測(cè)定6個(gè)以上的末端氨基酸序列，通過(guò)反推的核苷酸序列合成一套寡核苷酸探針。如果已有其它動(dòng)物的同種基因克0隆，因?yàn)槿祟惡蛣?dòng)物間在同一基因的核苷酸順序上存在較高的同源性，因此可利用已鑒定的動(dòng)物基因作探針來(lái)篩選人類基因克0隆。對(duì)于基因核苷酸序列背景清楚而無(wú)法獲得克0隆探針時(shí)，可采用PCR方法擴(kuò)增某段基因序列，并克0隆人合適的質(zhì)粒載體中，即可得到自己的探針。這種方法十分簡(jiǎn)便，無(wú)論基因組DNA探針還是cDNA探針都可以容易地獲得，而且，可以建立PCR的基因檢測(cè)方法，與探針雜交方法可作對(duì)比，可謂一舉兩得。