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反相色譜影響因素(1)柱長有機小分子和肽類的分辨率隨柱長的增加而增加．但是柱長增加并不能使蛋白質和核酸等生物大分子的分辨率顯著增加．它們在較短的柱子上往往也有很好的分離效果。(2)流動相的流速。有機小分子和肽類的分辨率對流動相流速非常敏感。而蛋白質和核酸等生物大分子的分辨率則不然。流速越小，柱子越長，色譜峰的寬度就越大，分辨率就越小。水是極性強的溶劑，在反相色譜中常常和基礎溶劑配合使用，向流動相中加入不同濃度的、可以與水混溶的有機溶1劑，以得到不同強度的流動相，這些有機溶1劑稱為修飾劑。制備色譜上樣過程中的流速對動態吸附容量影響很大。(3)溫度。溫度上升，流動相黏度下降，流動速度加快，且流動相與固定相之間的傳質速度加快，使分辨率增加。同時，溫度上升，分子熱運動增加，疏水性作用減弱。升高溫度要考慮目標物質的熱穩定性。(4)流動相組成。流動相的極性越大，溶質的分配系數越大，洗脫時間越長。RPC多采用降低流動相極性(水含量)的線性梯度洗脫法。水是極性強的溶劑，在反相色譜中常常和基礎溶劑配合使用，向流動相中加入不同濃度的、可以與水混溶的有機溶1劑，以得到不同強度的流動相，這些有機溶1劑稱為修飾劑。反相色譜中的有機溶1劑。此外，乙醇、四氫呋1喃、異丙1醇及二氧六環也常被用作修飾劑。有機溶1劑梯度的大小也會影響分辨率，一般梯度越小，分辨率越大。

分析性色譜的目的是定量或者定性測定混合物中各組分的性質和含量。但是并不是說一定要馬上更換，還可以從實際實驗效果看能否湊合使用。定性的分析性色譜有薄層色譜、紙色譜等，定量的分析性色譜有氣相色譜、液相色譜等。色譜法應用于分析領域使得分離和測定的過程合二為一，降低了混合物分析的難度縮短了分析的周期，是比較主流的分析方法。在中華人民共和國藥典中，有超過約600種化學合成藥和超過約400種中藥的質量控制應用了液相色譜的方法。

使用儀器不當：只要互相有10%比例就不會出現這個問題。另一原因是在用緩沖液鹽溶液（不論甲1醇含量有多少）作流動相時，實驗結束后沒有換甲1醇水沖洗，使得微滲的流動相干燥形成晶體造成。漏液：液相色譜儀從流動相瓶到廢液瓶之間的流路是一個全封閉體系，內部壓力很高，但外部卻能保證一滴不漏。不過，輸送泵漏液并不是非得馬上修不可，沖洗干凈并在以后的使用中多加小心一般都可以正常使用。檢測器漏液是個很麻煩的事，一般都是吸收池的問題，更換的費用相當高。但是并不是說一定要馬上更換，還可以從實際實驗效果看能否湊合使用。