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              發布時間:2020-11-30 15:45  







              生物有機肥產品生產菌種使用現狀

              細菌類生產用菌種除常見的芽孢外, 還出現了高地芽孢菌、 類干酪乳菌、 屎腸球菌、 鹽居固氮菌等新菌種, 其中, 高地芽孢菌和鹽居固氮菌普遍存在于土壤環境中, 未見致病性報道, 屬風險一級; 類干酪乳菌又名為副干酪乳菌, 雖為風險一級 , 但有從動物受傷部位分離到該菌的報道;屎腸球菌屬于乳酸菌類,屬風險二級, 建議謹慎使用。伯克霍爾德氏菌是一些具有生物防治、 促進植物生長和生物修復等功能的細菌, 但同時也是可以引起鼻疽、 類鼻疽病的致病菌, 因此真菌伯克霍爾德氏菌屬于風險三級, 需做致病性試驗, 建議慎用或不用。真菌類生產用菌株主要為絲狀真菌和酵母菌。哈茨木霉、 米曲霉、 淡紫紫孢菌、 長枝木霉、 綠色木霉、 棘孢木霉、 黑曲霉、 粉紅螺旋聚孢霉、 金龜子綠僵菌等屬于生物安全風險等級二級, 需按照NY/T 1109-2017 《微生物肥料生物安全通用技術準則》 進行毒理學測試。酵母菌主要以釀酒酵母為主, 還有少量東方伊薩酵母、杰丁塞伯林德納氏酵母 (原產朊假絲酵母、 杰丁畢赤酵母)、 膜醭畢赤酵母、 解脂耶羅威亞酵母等, 屬于生物安全風險等級一級, 可免做毒理學試驗。


                                                                        低溫生物菌種的制備是什么?

              將培養成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養基上,于25~28℃培養14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產上延續使用半年左右。放線孢子的培養基大多是采用麩皮或豌豆浸出液、牛肉膏及無機鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴大的扁瓶孢子培養基中,于28~37℃培養5~14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐 (6)的種子。如果有些生產菌種不產孢子,如赤霉產生菌或產孢子不多的,則可采用搖瓶(5)液體培養制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養基組分應是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿等),及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發酵罐(7)的種子應是生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。






                                                                    低溫生物菌種的技術規程

              1、安瓿管或凍存管的準備

              用圓底硼硅玻璃制品的安瓿管,或螺旋口的塑料凍存管。注意玻璃管不能有裂紋。將凍存管或安瓿管清洗干凈,121℃下高壓滅菌15-20分鐘,備用。
              2、 保護劑的準備
              保護劑種類要根據微生物類別選擇。配制保護劑時,應注意其濃度,一般采用10-20%甘油。
              3、 微生物保藏物的準備
              微生物不同的生理狀態對存活率有影響,一般使用靜止期或成熟期培養物。
              分裝時注意應在無菌條件下操作。
              菌種的準備可采用下列幾種方法:
              刮取培養物斜面上的孢子或菌體,與保護劑混勻后加入凍存管內;
              接種液體培養基,振蕩培養后取菌懸液與保護劑混合分裝于凍存管內;
              將培養物在平皿培養,形成菌落后,用無菌打孔器從平板上切取一些大小均勻的小塊(直徑約5-10毫米),真菌取菌落邊緣的菌塊,與保護劑混勻后加入凍存管內;
              在小安瓿管中裝1.2-2毫升的瓊脂培養基,接種菌種,培養2-10天后,加入保護劑,待保藏。
              4、 預凍

              預凍時一般冷凍速度控制在以每分鐘下降1℃為好、使樣品凍結到-35℃。





              低溫生物菌種德選育和培養

              要看你選什么規模的發酵是小試還是中試還是生產?另外,你說的菌種選育里應該是包括了培養基配制和擴大培養。所以,只能大概列一下。

              菌種選育:超低溫冰箱、無菌室、培養箱、搖床、分光光度計、檢測設備。

              培養基配制:電子天平、pH計、滅菌鍋、微波爐、電磁爐、冰箱。

              擴大再培養:滅菌鍋、搖床、抽濾瓶(或特質金屬瓶)、空調機組、臭氧發生器。

              發酵:配料罐、種子罐、發酵罐、補料罐(小試用流加泵)、有時會用到在線監測設備如乙醇檢測儀、生物傳感器、分光光度計等、空壓機、。

              分離提純:制水設備、制冷設備、濃縮機、細胞破碎儀、離心機、陶瓷膜、真空干燥設備、超低溫冷干機、造粒設備(不同產品用到不同的烘干設備)等,不同工藝所用設備也不同



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