原位雜交電話「在線咨詢」

原位雜交是指；分子雜交的一種形式。由未經抽提分離的染色體DNA，在原來位置上被變性成單鏈后，與探針進行分子雜交。1977年由本頓(W.D.Benton)和戴維斯(R.W.Davis)在原分子雜交基礎上發(fā)展的一種較新的分子雜交技術。方法是將菌落或噬菌斑轉移到硝9酸纖維素濾膜上，使在原位發(fā)生溶菌后變性的DNA，同濾膜原位結合，再與有放5射性同位素標記的特定核苷酸“探針”雜交，其結果可用放5射自顯影來顯示，出現銀粒的地方便是待測染色體DNA上與探針互補順序所在的位置。對快速檢測轉化群落中的DNA序列或任何一種插入的DNA序列，以及動植物的基因定位工作，都具有廣泛應用價值。(見“分子雜交”、“放5射自顯影”、“影印培養(yǎng)技術”)

多種探針標記檢測系統

基于地高3辛、生物素和熒光標記分子的標記和檢測系統是常見的原位雜交檢測方法。

熒光標記檢測常為直接探針標記方法，如在dUTP/UTP/ddUTP上連接Fluorescein后進行核酸標記。由于標記在核酸上的熒光分子必須經受雜交和洗脫過程中的考驗，以及熒光分子易于衰減，其檢測靈敏度受到一定的影響。但對熒光分子的直接檢測呈現的背景較低。

使用分支DNA信號擴增的RNA FISH

Invitrogen? ViewRNA?和PrimeFlow?檢測是使用分支DNA信號擴增 (bDNA) 來檢測特異性信號的直接熒光RNA ISH方法。 使用獨立但兼容的信號擴增系統讓RNA靶標的多重復用成為可能。 熒光RNA原位雜交檢測分為四個主要步驟：樣本制備、靶標雜交、信號擴增以及檢測。 該方法可實現更高的特異性，更低的背景值和更高的信噪比。