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發布時間:2021-03-31 13:16  





微生物計數
1.血細胞計數法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數,并求出每個小格所含細菌的平均數,再以此為依據,估算總菌數。
①此法的缺點是不能區分死菌和活菌。
②對壓在小方格界線上的細菌,應當取平均值計數。
③此法可用于測定培養液中酵母jun種群數量的變化
2.稀釋涂布平板法
原理:每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。培養基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌。
①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目
②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低,原因是當兩個活多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落。因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示。
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定。但不適于測定樣品中絲狀體微生物,例如放線jun或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等。
④此法若不培養成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上,經固定染色后在顯微鏡下計數,這樣又稱涂片計數法。染色可用臺盼藍,臺盼藍能使死細胞染成藍色,可分別計數死細胞和huo細胞。
微生物限度檢查
2.接種和稀釋
按下列要求進行供試液的接種和稀釋,制備微生物回收試驗用供試液。所加菌液的體積應不超過供試液體積的1%。為確認供試品中的微生物能被充分檢出,首先應選擇zui低稀釋級的供試液進行計數方法適用性試驗。
(1)試驗組 取上述制備好的供試液,加入試驗菌液,混勻,使每1ml供試液或每張濾膜所濾過的供試液中含菌量不大于100cfu。
(2)供試品對照組 取制備好的供試液,以稀釋液代替菌液同試驗組操作。
(3)菌液對照組取 不含中和劑及滅活劑的相應稀釋液替代供試液,按試驗組操作加入試驗菌液并進行微生物回收試驗。
若因供試品抗jun活性或溶解性較差的原因導致無法選擇zui低稀釋級的供試液進行方法適用性試驗時,應采用適宜的方法對供試液進行進一步的處理。就是說這種微生物在培養時,需要有氧氣加入,否則就不能生長良好。如果供試品對微生物生長的抑制作用無法以其他方法消除,供試液可經過中和、稀釋或薄膜過濾處理后再加入試驗菌懸液進行方法適用性試驗。
(3)MPN法 MPN法的精密度和準確度不及薄膜過濾法和平皿計數法,僅在供試品需氧菌總數沒有適宜計數方法的情況下使用,本法不適用于霉菌計數。若使用MPN法,按下列步驟進行。
取照上述“供試液的制備”“接種和稀釋”和“抗jun活性的去除或滅活”制備的供試液至少3個連續稀釋級,每一稀釋級取3份1ml分別接種至3管裝有9~10ml胰酪大豆胨液體培養基中,同法測定菌液對照組菌數。7-2013食品安全標準食品微生物學檢驗副溶血性弧菌檢驗GB4789。必要時可在培養基中加入表面活性劑、中和劑或滅活劑。
接種管置30~35℃培養3天,逐日觀察各管微生物生長情況。供試品檢查時,如果使用了表面活性劑、中和劑或滅活劑,應證明其有效性及對微生物無毒性。如果由于供試品的原因使得結果難以判斷,可將該管培養物轉種至胰酪大豆胨液體培養基或胰酪大豆胨瓊脂培養基,在相同條件下培養1~2 天,觀察是否有微生物生長。根據微生物生長的管數從表3查被測供試品每1g或每1ml中需氧菌總數的可能數。