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發布時間:2021-09-01 15:50  





蛋白質結晶技術發展的艱難歷程
科學家們研究蛋白質結晶技術花費了很長時間。1988年諾貝爾化學獎被授予三位德國科學家,原因是三個人通力合作,在世界上解析了一種膜蛋白——菌光合反應中心的高分辨率三維結構,它拉開了膜蛋白結構生物學的序幕,在生物學界影響非常大。之后,科學家們在基因組學和蛋白質組學領域不斷取得新進展,可以作為潛在靶向的蛋白質的數量呈指數級增加,然而這些方法獲得有用晶體的成功率不足20%。
2011年,英國帝國理工學院和薩里大學的科學家們使用一種“分子印跡聚合物(MIPs)”的材料,研發出了一種更有效的制造蛋白質晶體的方法。但是這種方法在結晶條件成分復雜,包含高鹽,,寬泛的酸堿區間等條件下,容易造成MIPs對蛋白質的印記作用失效。科研不斷深入,技術不斷迭代,目前,應用為廣泛的晶體制備方法當屬規模篩選,比如高通量蛋白質結晶篩選,即從成百上千個溶液條件中篩選出適合結晶的條件。據相關數據顯示,目前的高通量蛋白質結晶篩選的成功率僅為15.6%,嚴重制約了蛋白質結晶技術在結構生物學領域的應用和發展。缺乏、廣譜的蛋白晶體制備技術是目前結構生物學研究中的技術瓶頸。
近期,由深圳先進技術研究院喻學鋒研究員課題組研發的一種蛋白質結晶篩選添加劑——人工晶種混懸液打破了技術桎梏。新法的應用,能夠讓蛋白質晶體的結晶更簡便,更科學,更完整。
蛋白結晶板使用
蛋白質是水產品的主要組分,其含量測定在水產品加工及研究等方面應用極為廣泛.目前,各蛋白含量快速測定方法通常是在試管中進行反應并應用分光光度計測定,其操作過程較繁瑣,分析大批量樣品時效率低,上述缺點在高通量篩選、檢測等場合尤為突出.為了克服該不足,實現蛋白含量的快速高通量測定,本研究基于Folin-酚法,利用96孔板作為反應器并配合比色,建立了一種蛋白含量測定的微孔板方法并評價其合理性.該法測得樣品的蛋白含量與常規法結果無顯著性差異,反應在30-90 min顯色穩定,標準曲線的線性相關系數R2=0.9922,標準偏差范圍為0.07%-0.78%,檢測限為10 μg.與常規法相比,微孔板法保持了Folin-酚法的準確性及穩定性,同時具有通量高、節省樣品、試劑及測定時間等優點,在蛋白高通量快速測定方面更具優勢。
蛋白質晶體板結構介紹
所示完全伸展的鏈。L.C.鮑林和R.B.科里曾由氨基酸、小肽和有關化合物晶體結構的測定中歸納了肽鍵的鍵長、鍵角等。鏈中肽鍵N-C的鍵長為1.32埃,具有40%的雙鍵成分,與周圍四個鍵是共面的,且N-H和C=O具有反式構型。
這樣的二級結構以或大或小的含量,相當廣泛地存在于各種球蛋白和纖維蛋白中。在功能變化多端的球蛋白分子中,結構還有更高的層次。這兩類周期結構并不貫穿在整個多肽鏈中,而存在于某些分段中。這樣,多肽鏈折疊成球形的三級結構,并進一步決定其特異的功能。