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基于基因工程技術制備小分子特異性antibody

通過大量的實驗發現，小分子的偶聯物并不是不能產生特異性針對小分子的抗1體，而是效價過低，不滿足制備多克1隆抗1體和單克1隆抗1體的需要，但是基因工程手段為制備該類型小分子特異性antibody提供了新的思路。該技術的核心在于制備antibody的基因文庫，通過噬菌體展示技術、核糖體展示技術等獲取antibody的目的基因，再利用蛋白表達系統制備重組antibody或者改造antibody，以獲取針對小分子的特異性antibody。目前隨著antibody基因測序信息的公布和完善，為人工設計antibody提供了基礎，這也會以后小分子特異性antibody的制備提供了新的途徑。

RNA試劑盒注意事項

所有相關器皿耗材都應為RNase-free產品，操作過程要小心，帶口罩、手套避免環境中RNA酶污染樣品。

RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA不純，需電泳檢測。

使用時一定要根據自己的實驗需要購買專1用提取試劑盒， 如果不是專1用試劑盒，或許能提出RNA，但不能確保其質量以及完整性，會影響RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析、分子克1隆等后續實驗的結果。

當前提取效果好的是RNA提取試劑盒，但其售價較高，單次實驗費用花費太大，對精度要求不高的實驗沒有必要購買，當然還有其它的進口試劑盒，但是均存在價格高、訂貨周期長的問題（如果碰上國內無貨的時候，要從國外發貨，會等很長一段時間）。普通的提取實驗用國產的試劑盒就足以，價格不高，基本上各地均有現貨，如天根（國內生產的試劑盒中銷售面比較廣的一種）等，其價格比進口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯，性價比還可以

與DNA不同，RNA一般為單鏈長分子，不形成雙螺旋結構，但是很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結構乃至三級結構來行使生物學功能。

RNA的堿基配對規則基本和DNA相同，不過除了A-U、G-C配對外，G-U也可以配對。

在細胞中，根據結構功能的不同，RNA主要分三類，即tRNA（轉運RNA），rRNA（核糖體RNA），mRNA（信使RNA）。mRNA是合成蛋白質的模板，內容按照細胞核中的DNA所轉錄；tRNA是mRNA上堿基序列（即遺傳密碼子）的識別者和氨基酸的轉運者；rRNA是組成核糖體的組分，是蛋白質合成的工作場所。

PCR產物的回收（膠回收試劑盒）

1.膠回收的目的（1）去除非特異性擴增的產物（2）去除多余的底物（3）去除多余的Taq酶（4）得到目的片段

2.膠回收的過程（1）切膠：紫外下切膠，稱重。之后用槍頭將膠塊搗碎。切膠的刀片建議選用一次性刀片，實驗臺等也盡可能用乙醇擦拭干凈。可通過空EP管與裝膠EP管質量的差值計算膠的質量。注意切膠時盡可能避免切到條帶外的凝膠，且避免紫外時間過長。別忘記膠條有厚度，前后多余的部分也盡量切除。（2）溶膠：每1 mg膠加入1 μL膜結合液（MB），按比例1:1加入MB，55℃水浴溶解。每1~2 min震蕩混勻，待溶解后至少在水浴中保持1~2 min，保證膠塊完全溶解。在電泳過程中，DNA會與大分子的多糖緊密結合，凝膠的種類和質量不同，DNA與之結合力也不同，只有凝膠充分溶解DNA才能充分釋放。否則，凝膠將與DNA一起沉淀下來，洗脫后將影響回收結果的純度。（3）結合：將溶膠轉移至純化柱內，12000 rpm離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將純化柱重新插回收集管中。膠塊完全溶解后建議將膠液溫度降至室溫再上柱，因為純化柱在溫度較高時結合DNA的能力較弱。