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低溫生物菌種的注意事項

無論采用何種保藏方法，首先應該挑選典型菌種的優良純種來進行保藏，保藏它們的休眠體，如分生孢子、芽孢等。其次，應根據微生物生理、生化特點，人為地創造環境條件，使微生物長期處于代謝不活潑、生長繁殖受抑制的休眠狀態。這些人工造成的環境主要是干燥、低溫和缺氧，另外，避光、缺乏營養、添加保護劑或酸度中和劑也能有效提高保藏效果。

低溫生物菌種知多少？

實驗室菌種的傳代保藏過程

1. 按菌種說明書要求復溶菌粉，轉種于適當的增菌培養基內（G1），復壯后轉接至平板上，并于適當溫度下培養適當時間，分離出單個純種菌落，此為第2代（G2）。

2. 菌種鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，同時挑取純菌落轉接斜面菌種作為工作用菌種。此時，保藏菌種為第2代，但工作用菌種則為第三代。

3. 將第2代菌種管冷凍保存，將工作用菌種于適當溫度下培養適當時間后可用于試驗。

4. 取一支冷凍保存的G2代菌種轉種于平板和斜面培養基上，平板上的菌種制成冷凍保藏管第三代（G3），斜面培養基經適當溫度下培養適當時間后用作工作用菌種（W3）。

5. 將第三代菌種（G3）冷凍或低溫保存，將生長、轉種后的G2菌種經滅菌處理后丟棄。

6. 當工作用菌種代數小于5時，可直接用上一代工作用菌種轉接下一代工作用菌種，如W3可直接轉接為W4。

7. 按上述程序操作，直至G4轉為W5為止，需重新開啟安瓿，再重復上述操作程序、保藏和使用菌種。

以上方法中，菌種被分為兩類。傳代用菌種和工作用菌種，傳代用菌種用于甘油冷凍管法保藏，工作用菌種用斜面低溫保藏法保藏。

實驗證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于細菌（需氧）、酵母菌的傳代、保藏、真菌和芽孢類細菌則需應用其它方法。

                                                           低溫生物菌種對沙土有什么要求？

1 沙土管制備
將河沙用60目過篩，棄去大顆粒及雜質，再用80目過篩，去掉細沙。用吸鐵石吸去鐵質，放入容器中用10%鹽酸浸泡，如河沙中有機物較多可用20%鹽酸浸泡。24小時后倒去鹽酸，用水洗泡數次至中性，將沙子烘干或曬干。另取地面下40～60cm非耕作層貧瘠且粘性較小的土，研碎，100目過篩,水洗至中性，烘干。將處理后的沙、土按質量比2∶1混合。混勻的沙土分裝入安瓿管或小試管中，高度為1cm左右，塞好棉塞，121℃濕熱滅菌30min。隨機抽取滅菌后的砂土管若干支，無菌條件下取少許砂土至營養肉汁培養基中，30℃培養24小時，檢查無微生物生長后方可使用。
      2 斜面培養物的制備
      參照定期移植法。
      3 制備菌懸液
     向培養好的斜面培養物中注入3～5mL無菌水，洗下細胞或孢子制成菌懸液。用無菌吸管吸取菌懸液，均勻滴入沙土管中，每管0.2～0.5mL。霉菌可直接挑取孢子拌入沙土管中。
      4 干燥
真空抽去沙土管中水分。
      5 保藏
      將沙土管用火焰熔封后存放于低溫(4～6℃)干燥處保藏，每隔半年檢查一次菌種存活性及純度。或將沙土管直接用牛皮紙或塑料紙包好，置干燥器內保存。
保藏時間2～10年。
     6 恢復培養
     無菌條件下打開沙土管，取部分沙土粒于適宜的斜面培養基上，長出菌落后再轉接一次。或取沙土粒于適宜的液體培養基中，增殖培養后再轉接斜面。