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發(fā)布時(shí)間:2021-10-05 08:17  






在選用支原體PCR法檢測來替代藥典方法時(shí),需要考慮如下兩個(gè)方面:
首先一步是要使用符合歐洲藥典要求,經(jīng)過全方面驗(yàn)證的支原體檢測試劑盒,第二部是自我驗(yàn)證,即確認(rèn)所用的樣本基質(zhì)對于該試劑盒方法是合適的,并且操作過程是正確的。小規(guī)模的室內(nèi)驗(yàn)證通常需要采用三個(gè)不同批次的試劑盒,然后加入10CFU的標(biāo)準(zhǔn)品,做復(fù)孔(通常是8個(gè)復(fù)孔),并且至少選擇3個(gè)支原體物種進(jìn)行驗(yàn)證。
有的支原體標(biāo)準(zhǔn)品廠家會提供CFU與基因拷貝數(shù)的比值,以方便二者的換算。因?yàn)?0CFU只能確定PCR能夠達(dá)到的檢測限在10CFU以下,但無法具體確定靈敏度的數(shù)值。帶DNA拷貝數(shù)標(biāo)定的基因組DNA標(biāo)準(zhǔn)品則可進(jìn)一步確定檢測限的數(shù)值。
總之,PCR方法很有用,但需要避免假陰性,驗(yàn)證時(shí)應(yīng)使用陽性對照、陰性對照、無模板對照和內(nèi)控對照,以保證PCR反應(yīng)正常,以及支原體少量存在時(shí)確實(shí)能檢出來,支原體不存在時(shí)也確保是結(jié)果陰性,從而使得PCR方法在工業(yè)應(yīng)用時(shí)能確保zui終結(jié)果的可靠。
信使RNA(mRNA)早先發(fā)現(xiàn)于1960年,在蛋白質(zhì)合成過程中負(fù)責(zé)傳遞遺傳信息、直接指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成,具有以下特點(diǎn)。
1.含量低,占細(xì)胞總RNA的1%~5%。
2.種類多,可達(dá)105種。不同基因表達(dá)不同的mRNA。
3.壽命短,不同mRNA指導(dǎo)合成不同的蛋白質(zhì),完成使命后即被降解。細(xì)菌mRNA的平均半衰期約為1.5分鐘。脊椎動物mRNA的半衰期差異極大,平均約為3小時(shí)。
4.長度差異大哺乳動物mRNA長度為5×102~1×105nt原核生物與真核生物的mRNA雖然在結(jié)構(gòu)上有差異,但功能一樣,都是指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成的模板。
核酸檢測是確診新冠肺1炎的重要標(biāo)準(zhǔn),而檢測流程中的每一個(gè)環(huán)節(jié)都是精細(xì)活,容不得半點(diǎn)馬虎,是與病毒的正面交鋒,核酸檢測是如何“識別”病毒的?
從樣本核對、取樣滅活、核酸提取、體系配制、上機(jī)擴(kuò)增到zui后結(jié)果分析,核酸檢測過程復(fù)雜繁瑣,為了保證結(jié)果準(zhǔn)確性需要一套嚴(yán)密流程,每一批樣本在實(shí)驗(yàn)室里至少需要4到6個(gè)小時(shí)的篩查,對于出現(xiàn)異常的樣本耗時(shí)則更長,一般檢測呈陽性的樣本,會再次復(fù)核,一般都需要8到10個(gè)小時(shí)才能完成檢測報(bào)告。