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發布時間:2021-10-26 06:26  





蛋白質結晶涉及四個重要步驟
1. 蛋白質純度的確定。如果不夠非常純,必須要進一步純化。
2. 蛋白質溶解于合適的溶劑中,從中它能通過一種鹽或有機化合物而析出。溶劑通常是水-緩沖劑溶液,有時加,如2--2,4-(MPD)。正常情況下,沉淀劑也被加入,但是濃度不高于使沉淀產生。對于不溶于水-緩沖劑或水-的膜蛋白,還需要加入去污劑。
3. 使溶液過飽和。在這一步中,小聚集體形成,它是晶體生長所需的核。對小分子的結晶來說,相比于蛋白質更為人熟知,晶核的自發形成需要提供表面張力能。一旦這個能障被突破了,晶體開始生長。能障在高水平的過飽和度時很容易克服。因此,在高過飽和度時,晶核更易自發形成。晶核的形成可作為一個過飽和度和其他參數的函數通過多種方法來研究,包括光散射、熒光去極化及電子顯微鏡。
4. 一旦晶核形成,晶體生長正式開始。對低分子量的化合物而言,新分子會逐步結合到正在生長的晶體表面。這是由于這些位置的結合能比較大,相對于分子結合到平滑的表面。這些步驟要么由晶系缺陷造成,要么發生在表面隨機形成的晶核。
蛋白結晶板技術
提出來的一項新型的分析技術,是當前分析科學活躍的發展領域之一,代表了新世紀分析儀器的發展方向。微流控芯片的發展有賴于不斷出現的微機電加工技術,微流控芯片的結構越來越復雜,功能也越來越多樣化,由此,研究和探索簡便的加工技術成為微流控技術發展的一個重要組成部分,本的研究工作將圍繞著微流控蛋白質結晶芯片不同材料的性能與功能要求來進行相關加工技術的探討。 蛋白質結晶微流控芯片是一種用于蛋白質結品條件高通量、快速篩選的新設備,對于結構生物學的發展具有重要意義,是目前研究的熱點。本根據蛋白質結晶系統的要求,設計了具有雙層結構的微流控芯片。
蛋白結晶板
以蛋白質晶體學為主要手段的結構基因組學研究通常包括選靶、、表達、純化、晶體篩選與優化、X射線衍射數據收集與結構解析等步驟。其中,獲得滿足衍射數據收集要求的高質量蛋白晶體是大的'瓶頸'。我們在人類細胞內氯離子通道蛋白2(CLIC2)結構與功能研究中發現用5,5'二硫雙-2-甲酸(處理,可以顯著提高CLIC2晶體質量,成功收集了分辨率至2埃的衍射數據試劑作為一個檢測巰基化合物的經典試劑,通常用在半胱氨酸或含量測定上。在蛋白晶體學領域里以獲得蛋白晶體為目的的試劑修飾例子實際并不多。我們將其應用在蛋白結晶學領域,使用Ellman試劑修飾方法使蛋白晶體質量得到有效改善。