臺灣洋蔥亞細胞定位方法電話“本信息長期有效”

武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年，是一家以實驗技術研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術公司；方法首先采用Western印跡方法檢測過表達MAGI3后E-cadherin蛋白表達條帶的遷移變化,。公司實驗中心有分子生物學平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺；可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。

多胺作為一種多聚陽離子,在基因表達、蛋白活性等多層面調(diào)節(jié)細胞功能。多胺轉(zhuǎn)運蛋白能夠特異性介導多胺類物質(zhì)跨膜運輸,在調(diào)節(jié)多胺濃度、調(diào)控抗性基因表達、維持mRNA水平、增強植物抗逆性等方面具有重要功能。構建PnCHI1的原核表達載體,誘導并純化獲得重組蛋白,體外平板抑菌實驗結果顯示PnCHI1原核重組蛋白對尖孢鐮刀菌、茄腐鐮刀菌、輪枝鐮刀菌3種三七根腐病菌的菌絲生長具有很強的抑制活性。目前,已知擬南芥(Arabidopsis thaliana)LHR1基因編碼質(zhì)膜多胺轉(zhuǎn)運蛋白AtPUT3,控制多胺的吸收,參與植物熱脅迫早期反應中的分子調(diào)控過程,但水稻中(Oryza sativa),多胺參與植物熱脅迫早期反應的具體分子機制尚不明確。通過序列對比,發(fā)現(xiàn)水稻Os02g47210和Os03g37984是擬南芥AtPUT3的功能同源基因。為了初步闡明水稻多胺轉(zhuǎn)運蛋白LHR1在熱脅迫早期防御反應及提高植物耐熱性上的功能,本研究利用生物信息學、生化與分子生物學實驗、遺傳學等手段對水稻LHR1同源基因的功能進行初步研究,結果如下:1.了水稻OsLHR1(Os03g37984.1、2、3和Os02g47210)基因全長CDS,并對該基因編碼的蛋白質(zhì)進行有效的生物信息學分析,結果顯示:Os03g37984有5種不同的剪切方式,編碼5種OsPUT3蛋白。

武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年，是一家以實驗技術研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術公司；構建MTR_8g079250的葉片亞細胞定位載體,通過根癌農(nóng)介導注射葉片的方式進行轉(zhuǎn)化,結果表明目的基因主要定位在細胞膜和細胞核上。公司實驗中心有分子生物學平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺；可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。

目的構建通用型植物GFP標簽蛋白表達載體,研究蛋白質(zhì)的細胞內(nèi)定位對蛋白質(zhì)組學和代謝組學等研究的意義。方法構建2種GFP標簽蛋白質(zhì)表達載體,分別在GFP的N和C端預留位點,以目的基因。利用該基因載體,分別內(nèi)切酶Fok I的切割結構域與MS2噬菌體外殼蛋白MCP的串聯(lián)蛋白（Fok I：MCP：Fok I,FMF）至GFP的N和C端,得到FMF與GFP的融合蛋白GFP：FMF和FMF：GFP,其中FMF的N端帶有細胞核定位信號。從圖B中發(fā)現(xiàn)GaMYB2-GFP的融合表達載體只能在細胞核中能看到綠色熒光，這進一步證明該蛋白不具有跨膜蛋白結構，定位在細胞核中，具有轉(zhuǎn)錄因子的一般特征。利用農(nóng)介導植物瞬時表達侵染本氏和洋蔥表皮細胞,觀察GFP熒光表達情況。結果成功構建了2種融合了目的基因和GFP的表達載體p ER35GFP-FMF和p ER35FMF-GFP。激光共聚焦結果顯示侵染了只含GFP載體的農(nóng)的細胞,可在細胞核和細胞質(zhì)中檢測到GFP的綠色熒光,而侵染了含核定位信號FMF：GFP和GFP：FMF 2種融合蛋白載體的農(nóng)的細胞,只在細胞核中觀察到綠色熒光。結論該載體系統(tǒng)可運用于研究蛋白質(zhì)在植物細胞中的亞細胞定位,具有簡單、和通用性的特點。

武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年，是一家以實驗技術研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術公司；利用農(nóng)介導植物瞬時表達侵染本氏和洋蔥表皮細胞,觀察GFP熒光表達情況。公司實驗中心有分子生物學平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺；可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。

柑橘潰瘍病是由地毯草黃單胞柑橘致病變種(Xanthomonas axonopodis pv.citri,Xac)引起的一種病害,可影響大部分的商業(yè)柑橘栽培品種,造成嚴重的經(jīng)濟損失。選育抗病品種是解決該病害問題的根本途徑,其中,利用基因工程將抗病基因?qū)朐耘嗥贩N是解決柑橘病害的一條快速而有效的途徑。WRKY轉(zhuǎn)錄因子和病程相關蛋白(pathogenesis-related proteins,PRs)在植物抗病信號調(diào)控途徑中起著重要作用。鈣依賴而鈣調(diào)素不依賴的蛋白激酶(calcium-dependent/calmodulin-independentproteinkinases,CDPKs)是一類僅在植物和部分原生生物中存在的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,在鈣信號轉(zhuǎn)導中具有重要功能。本研究根據(jù)柑橘潰瘍病高感品種紐荷爾臍橙(Citrus sinensis(L.)Osbeck)和高抗品種四季橘(Citrus madurensis)受潰瘍病侵染后的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),篩選了在這兩個品種中表達差異顯著的24個WRKY和4個PR基因進行研究,在此基礎上,詳細研究了4個WRKY基因和2個PR1基因在柑橘潰瘍病抗性中的功能和作用。具體研究結果如下:1.候選基因的和生物信息學分析了Cs WRKY22、Cs WRKY50、Cs WRKY72-1、Cs WRKY72-2、和Cs PR1-1、Cs PR1-2的編碼序列,ORF分別為921bp、480bp、1809bp、1767bp、501bp和480bp。用MEGA5.2軟件分析其與其他植物同家族蛋白氨基酸序列的親緣關系,并構建進化樹。發(fā)現(xiàn)Cs WRKY22與可可WRKY29,Cs WRKY50與棗WRKY50,Cs WRKY72與可可WRKY72,Cs PR1-1與可可PR-1,Cs PR1-2與龍眼PR-1的親緣關系較近。