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發布時間:2021-10-18 03:13  






小分子類物質包含多肽、天然小分子、化學合成小分子等一系列的物質,被廣泛用于medicine等各個領域。以往小分子的定量檢測主要通過氣相和液相色譜完成,存在周期長,檢測儀器價格昂貴等多方面的不足。那么immune檢測技術可以用于定量檢測小分子嗎?
免1疫檢測試劑盒的技術基礎就是抗原和抗1體的特異性結合,小分子特異性抗1體的制備即是小分子immune檢測試劑盒制備的關鍵之處。小分子由于分子量小,結構簡單,在免1疫學上劃歸為半抗原(Hapten),即只有immune反應性而沒有immune原性的一類物質,不能直接刺激機體產生antibody但是卻擁有和antibody結合的特性。隨著抗1體制備技術的發展,小分子特異性抗1體的制備技術顯得更為多元化
在選用支原體PCR法檢測來替代藥典方法時,需要考慮如下兩個方面:
首先一步是要使用符合歐洲藥典要求,經過全方面驗證的支原體檢測試劑盒,第二部是自我驗證,即確認所用的樣本基質對于該試劑盒方法是合適的,并且操作過程是正確的。小規模的室內驗證通常需要采用三個不同批次的試劑盒,然后加入10CFU的標準品,做復孔(通常是8個復孔),并且至少選擇3個支原體物種進行驗證。
有的支原體標準品廠家會提供CFU與基因拷貝數的比值,以方便二者的換算。因為10CFU只能確定PCR能夠達到的檢測限在10CFU以下,但無法具體確定靈敏度的數值。帶DNA拷貝數標定的基因組DNA標準品則可進一步確定檢測限的數值。
總之,PCR方法很有用,但需要避免假陰性,驗證時應使用陽性對照、陰性對照、無模板對照和內控對照,以保證PCR反應正常,以及支原體少量存在時確實能檢出來,支原體不存在時也確保是結果陰性,從而使得PCR方法在工業應用時能確保zui終結果的可靠。
棉花等酚類、多糖類物質較多的植物DNA提取法:
1 取2g新鮮幼嫩的葉片放入研缽中,加入液氮后快速、充分研磨,待成極細的粉末狀時迅速轉入到50ml離心管中。
2 在50ml離心管中加入10ml冰預冷的提取緩沖液,在渦懸振蕩器上充分混勻。
3 于4℃,2700×g離心20分鐘,倒去上清液。
4 在沉淀中加入5ml裂解緩沖液,在渦旋振蕩器上充分混勻。
5 于65℃水浴鍋中溫育30min。
6 加入5ml氯1仿/異戊1醇(24/1),并上下翻轉以充分混合。
7 于4℃,2700×g離心5分鐘。
8 轉移上層水相至一新的50ml離心管中。
9 重復步驟7-9一次。
10 加入2/3體積的冰預冷的異丙1醇,并上下翻轉以充分混合,至-20℃2h。
11 于4℃,1200×g離心10min。
12 在一新管中加入20ml含80%乙醇15mmol/LNaAc溶液,用玻棒將DNA轉入該管(如不能直接用玻棒纏出,可離心后倒出上清,再在其中加入20ml含80%乙醇15mmol/LNaAc溶液),放置20min后稍許離心,移走上清并吸出殘存乙醇,室溫干燥。
13 加入1 0mlTE(10mmol/LTris-HClPH=8 0,1mmol/LEDTA)并加入終濃度為20(g/L的RNaseA,過夜。
14 風干,用50μlTE緩沖液溶解,存于-20℃備用。