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發布時間:2021-08-01 12:58  





ELISA試劑盒的組成結構
1、 操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
此IBL試劑盒能用于小鼠清,EDTA血漿,細胞上清中白介素-6的定量檢測。
ELISA試劑盒——ELISA實驗通用規則
1、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發。
Elisa試劑盒的注意事項
Elisa試劑盒是否滅活:加熱可滅清中補體系統,在較少數情況下(培養ES細胞,平滑肌細胞時)建議滅活,在培養其余細胞時不建議滅清。滅活非常容易產生沉淀,如必須滅活請按56℃,30 min,輕微搖晃原則操作,滅活溫度高、時間長、搖晃不均都容易產生沉淀。
Elisa試劑盒培養基:無培養基在結果重復性、細胞體外分化方面有優勢,但是,仍然是培養液中基本的添加物,尤其是在原代培養或細胞生長狀態不良時,常常會先使用有的培養液進行培養,待細胞生長旺盛后再換成培養液。
Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案
不正常的標準曲線
1 錯誤的方法重懸標準品 加入正確量的溶液重懸標準品,重懸充分
2 標準品稀釋錯誤 按照說明書要求稀釋標準品
3 標準品污染 使用一次性的滅菌吸頭, 標準品貯存于2-8 ℃
4 錯誤的倍比稀釋步驟 按照說明書倍比稀釋標準品
5 波長選擇錯誤 TMB為底物和以OPD為底物的試劑盒均有使用,而 前者比色波長為450nm,后者為492nm。雙波長比色分析優于單波長。
6 標準品混用 不同批號試劑勿混用
7 試劑盒在運輸途中時間太長,溫度太高,標準品失活 盡量縮短運輸時間,夏季應放冰塊降溫
8 ELISA未終止而直接檢測450nm和620nm TMB顯色需終止后檢測,否則會出現620nm比450nm讀數高的現象。(數值仍有梯度規律)