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發(fā)布時(shí)間：2021-09-04 02:29
液相色譜儀分類
液相色譜儀依據(jù)樣品在固定相和流動(dòng)相分離過程的物理化學(xué)原理，可分為以下五種。
1、吸附色譜：
用固體吸附劑作固定相，以不同極性溶劑作流動(dòng)相，依據(jù)樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來實(shí)現(xiàn)分離。
2、分配色譜：
用載帶在固相基體上的固定液作固定相，以不同極性溶質(zhì)作流動(dòng)相，依據(jù)樣品中各組分在固定液上分配性能的差別來實(shí)現(xiàn)分離。根據(jù)固定相和液體流動(dòng)相相對極性的差別，又可分為正相分配色譜和反相分配色譜。當(dāng)固定相的極性大于流動(dòng)相的極性時(shí)，可稱為正相分配色譜或簡稱正相色譜;若固定相的極性小于流動(dòng)相的極性時(shí)，可稱為反相分配色譜或簡稱反相色譜。
3、離子色譜：
用微粒離子交換劑作固定相，以具有一定pH值的緩沖溶液作流動(dòng)相，依據(jù)離子型化合物中各離子組分與離子交換劑上表面帶電荷基團(tuán)進(jìn)行可逆性離子交換能力的差別而實(shí)現(xiàn)分離。
4、體積排阻色譜：
用化學(xué)惰性的多孔性凝膠作固定相，按固定相對樣品中各組分分子體積排阻滯作用的差別來實(shí)現(xiàn)分離。以水溶液作流動(dòng)相的體積排阻色譜柱，稱為凝膠過濾色譜;以有作流動(dòng)相的體積排阻色譜法，稱為凝膠滲透色譜法。
5、親和色譜：
以在不同基體上，鍵合多種不同特性的配位體作固定相，用具有不同pH值的緩沖溶液作流動(dòng)相，依據(jù)生物分子與基體上鍵聯(lián)的配位體之間存在特異性親和作用能力的差別，而實(shí)現(xiàn)對具有生物活性的生物分子的分離。
制備型液相色譜簡介
色譜是根據(jù)混合物中各組分的化學(xué)特性對其進(jìn)行分離的一種分離方法。制備型(Prep)色譜或純化色譜則是指利用色譜方法分離出一定量達(dá)到足夠純度的化合物用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)或處理的色譜方法?？茖W(xué)家首先要確定目標(biāo)化合物，然后開發(fā)色譜方法，將目標(biāo)化合物從原料、副反應(yīng)或其它雜質(zhì)中成功分離出來。其總體目標(biāo)是滿足日益增長的高通量和高的效率需求，同時(shí)運(yùn)用各種純化技術(shù)達(dá)到相應(yīng)的規(guī)模、純度和重現(xiàn)性要求。
從大型制藥企業(yè)到小規(guī)模天然產(chǎn)物研究團(tuán)隊(duì)，純化色譜在眾多科研機(jī)構(gòu)中應(yīng)用非常廣泛。盡管應(yīng)用領(lǐng)域各不相同，用戶的一般要求卻非常相似，他們都希望分離出的終產(chǎn)物純度能達(dá)到95％或更高。
液相色譜的操作步驟
1).首先對流動(dòng)相進(jìn)行過濾，根據(jù)需要選擇不同的濾膜，一般為有機(jī)系和水系，常用的孔徑為0.20um和0.45um。
2).對抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。
3).正常情況下，儀器首先用甲醇沖洗10-20分鐘，然后再進(jìn)入測試用流動(dòng)相(如流動(dòng)相為緩沖試劑，則要二次重蒸水沖洗10-20分鐘，直至色譜柱中有機(jī)相沖凈為止)。
4).一般情況下，流動(dòng)相沖洗20-30分鐘后，儀器方可穩(wěn)定，重要的是儀器基線走后，方可進(jìn)樣測試。
5).同時(shí)進(jìn)兩針標(biāo)樣，將其結(jié)果相比較，其結(jié)果的比值在0.98-1.02之間后，就可以正式進(jìn)行樣品的測試了。
6).樣品測試結(jié)束后，就要進(jìn)行色譜儀及色譜柱的清洗和維護(hù)。如流動(dòng)相為緩沖試劑，同樣也要用重蒸水清洗10-20分鐘，方可用有機(jī)相進(jìn)行保護(hù)，否則，有損色譜柱。
7).關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。
8).填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。
