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應(yīng)用過(guò)程中的液相色譜四個(gè)關(guān)鍵因素1、液相色譜儀本身：通常儀器本身是沒(méi)有問(wèn)題的，尤其是新買(mǎi)回來(lái)的儀器。就儀器本身而言，重要的是儀器的檢驗(yàn)，新買(mǎi)回來(lái)的儀器一般都是由賣方先對(duì)儀器做系統(tǒng)的確認(rèn)工作(包括 IQ、 PQ、 OQ)，確認(rèn)順利通過(guò)后，再請(qǐng)國(guó)家或省級(jí)儀器檢定局的來(lái)校驗(yàn)，檢定合格后再用，檢定合格后再用，除此之外，還可以放心使用，此外，還可為儀器的正常使用提供保障。2、色譜條件：通常的色譜條件包括流動(dòng)相、色譜柱、檢測(cè)波長(zhǎng)、流速和進(jìn)樣量。移動(dòng)相是指在制備流動(dòng)相所用水和試劑試液時(shí)，水的電阻率一般不超過(guò)18.2兆歐，而水的電阻率不超過(guò)18.2兆歐，其原因是為了防止水和試劑試液中雜質(zhì)對(duì)色譜結(jié)果的干擾，測(cè)試液采用色譜級(jí)別。

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③先用溶劑將檢測(cè)池沖洗，具體用哪種具體的試樣而定；若沖了還不行，把檢測(cè)池卸下來(lái)，看燈能量，若能量還可以(有個(gè)幾千)，可能得清洗光路。首先還是請(qǐng)工程師來(lái)清洗，因?yàn)橐謇淼牧慵谔綔y(cè)器下面有一個(gè)黑色的碎片，中間有一條縫，而且那一塊的螺絲都是八角的，卸起來(lái)很麻煩。④拿出5個(gè)樣品盤(pán)，可以看到里面有一個(gè)黑色凸起(看不清是用電筒)，平時(shí)進(jìn)樣針就是從那個(gè)地方吸的。伸手就能卸下來(lái)，里面有一個(gè)小白圈(用多了自然就黑了)，換一個(gè)新的就好了，一般只有10個(gè)才能買(mǎi)儀器。

在實(shí)際應(yīng)用中，有幾點(diǎn)需要注意：(1)流動(dòng)相過(guò)濾在實(shí)際操作中由于不可能做到專瓶，容易造成交叉污染，對(duì)于復(fù)雜的配比流動(dòng)相影響較大。因此，使用后一定要用水沖洗。在使用之前不放心的話也可以清洗。(2)流動(dòng)相過(guò)濾經(jīng)濟(jì)成本較高。購(gòu)買(mǎi)一套濾芯要3000多元，而且濾芯是比較容易損壞的設(shè)備。過(guò)濾器成本高，有的進(jìn)口一片就要幾十元。按照普通液相柱的正常使用壽命計(jì)算，過(guò)濾片的成本將遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于色譜柱。而且在使用過(guò)濾片時(shí)，有些會(huì)引起流動(dòng)相二次污染，原因是濾片不合格。(3)流動(dòng)相過(guò)濾耗時(shí)較長(zhǎng)。對(duì)于溶劑過(guò)濾器，有一個(gè)預(yù)清洗、安裝、使用、使用后清洗、烘干的過(guò)程，也至少要有一個(gè)小時(shí)。這一代價(jià)也不容忽視。

造成堵塞的原因之二：使用流動(dòng)相時(shí)細(xì)菌污染。指出：剛開(kāi)始流動(dòng)相無(wú)長(zhǎng)菌性細(xì)菌，在使用中產(chǎn)生細(xì)菌污染。在使用多元液相色譜儀時(shí)，這主要是一個(gè)不健康的使用習(xí)慣。舉例來(lái)說(shuō)：50%流動(dòng)的流動(dòng)相，有兩種使用方法。一種方法是在上機(jī)之前把水混合在一起，另一種方法是在流路 A放純，而流路 B放純水。就單純的實(shí)驗(yàn)效果而言，后一種具有明顯的優(yōu)勢(shì)：一是簡(jiǎn)單，無(wú)需另一種計(jì)算比例混合，二是比例，可以得到保留時(shí)間的重復(fù)性的實(shí)驗(yàn)效果。但它有一個(gè)致命的缺點(diǎn)，就是純水在流動(dòng)相瓶中存活數(shù)天(許多情況下，不僅用純水作為流動(dòng)相，而且用緩沖鹽溶液，本身就是的肥料，細(xì)菌生長(zhǎng)得更快)，一旦出現(xiàn)細(xì)菌柱子，就會(huì)迅速分解。這樣就要求操作者每次實(shí)驗(yàn)都要用新配制的純水，更要求每次實(shí)驗(yàn)后要換水，換成沖洗干凈，這點(diǎn)在實(shí)際工作中很多人意識(shí)不強(qiáng)，但在多次使用中總有一兩次會(huì)漏掉，但往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響。由于液相色譜柱的堵塞是不可逆的。

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探測(cè)器帶來(lái)的影響

作為一個(gè)例子，熱導(dǎo)檢測(cè)器 TCD就是利用 TCD的載氣和被測(cè)氣體的導(dǎo)熱系數(shù)不同，在橋上檢測(cè)產(chǎn)生的不平衡電壓與被測(cè)成分的濃度成比例，實(shí)現(xiàn)了被測(cè)成分的測(cè)量。①污染 TCD檢測(cè)器可引起基線漂移或出現(xiàn)階基線，并可產(chǎn)生高噪聲。② TCD熱阻絲燒斷，基線降到零點(diǎn)。③ TCD電源的供應(yīng)不穩(wěn)定，出現(xiàn)不規(guī)則的脈沖干擾峰。

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載氣效應(yīng)

載氣將分析試樣流過(guò)固定相，分離后的氣體連續(xù)一次被載氣帶出色譜柱，送到檢測(cè)部位進(jìn)行檢測(cè)。液相色譜分離效率受載氣流量、載氣特性和載氣壓力等操作條件的影響。①載氣量較低，會(huì)使氣液保持時(shí)間增加，靈敏度下降，或出現(xiàn)圓形、拖尾峰。②載氣量偏大，會(huì)造成噪聲大或不能分離的組分。③載氣控制不穩(wěn)定，會(huì)引起不規(guī)則基線漂移或波狀基線漂移。上述情況要檢查減壓閥是否超出使用范圍，如有必要應(yīng)更換減壓閥，再檢查是否有漏氣現(xiàn)象。

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固相萃取柱

固相萃取柱(英文，簡(jiǎn)稱 SPE column，或 Solid Phase extraction Cartridges，簡(jiǎn)稱 SPE cartridges)是一種樣品前處理設(shè)備，從層析柱發(fā)展而來(lái)。適用于各類食品、農(nóng)畜產(chǎn)品、環(huán)境樣品及生物樣品中目標(biāo)化合物的預(yù)處理。許多(GB/T)以及工業(yè)分析標(biāo)準(zhǔn)中都廣泛采用固相萃取技術(shù)。

固相萃取柱容量是指固相萃取柱填料的吸附能力。用硅膠作基質(zhì)的固相萃取柱，容量一般在1~5 mg/100 mg/100 mg/100 mg，或柱容為1%~5%。硅膠復(fù)合離子交換吸附劑的容量以 meq/g表示，即每克填料的容量為 X毫克當(dāng)量。這種填料的容量一般為0.5~1.5 meq/g。

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原則：

SPE技術(shù)以液-固相色譜理論為基礎(chǔ)，對(duì)樣品進(jìn)行選擇性吸附、選擇性洗脫等富集、分離、凈化，是一種包含液-固相物理萃取的過(guò)程，也可近似地視為一個(gè)簡(jiǎn)單的色譜過(guò)程。SPE是利用選擇性吸附和選擇性洗脫的液相色譜分離原理。比較常用的方法是將所測(cè)物質(zhì)通過(guò)該吸附劑，保留所測(cè)物質(zhì)，再選用合適的強(qiáng)度溶劑沖去雜質(zhì)，然后用少量的溶劑迅速洗脫測(cè)物質(zhì)，達(dá)到快速分離、凈化和濃縮的目的。還可選擇性吸附干擾雜質(zhì)，而讓被測(cè)物質(zhì)流出；或同時(shí)吸附雜質(zhì)和被測(cè)物質(zhì)，再用適當(dāng)?shù)娜軇┻x擇性洗脫被測(cè)物質(zhì)。