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發(fā)布時間:2020-08-08 12:21  





廣州勱博儀器有限公司產品服務包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。而熒光定量PCR可以在反應進行過程中進行累積擴增產物的分析和檢測,即“實時”。
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PCR反應過程中產生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)方式生成模板,從而進入平臺期。在傳統(tǒng)的PCR中,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應的終擴增產物,因此用此終點法對PCR產物定量存在不可靠之處。在real-time Q-PCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴增相關的熒光信號,隨著反應時間的進行,監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲線。在相對定量中,其前提是假設內源控制物不受實驗條件的影響的,合理地選擇合適的不受實驗條件影響的內源控制物也是實驗結果可靠與否的關鍵。
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在PCR反應早期,產生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別,而后熒光的產生進入指數(shù)期、線性期和終的平臺期,因此可以在PCR反應處于指數(shù)期的某一點上來檢測PCR產物的量,并且由此來推斷模板i初的含量。為了便于對所檢測樣本進行比較,在real-time Q-PCR反應的指數(shù)期,首先需設定一定熒光信號的域值,一般這個域值(threshold)是以PCR反應的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號(baseline),熒光域值的缺省設置是3~15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍。另外,熒光定量PCR的結果無需通過瓊脂糖凝膠電泳來評估,大大節(jié)省實驗時間,提高實驗效率。
廣州勱博儀器有限公司產品服務包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。隨著生物芯片技術和熒光探針定量技術的結合,熒光定量PCR在醫(yī)學檢測及其他各個領域中的應用前景將更加廣闊,令人欣喜。
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FQ-PCR在醫(yī)學栓測中有價值的應用領城就是對感i染性疾病的診斷,只要有限的核酸序列清楚,運用FQ-PCR技術,檢測任何病原體。目前,對一些培養(yǎng)周期長或缺乏穩(wěn)定可靠的檢測手段的病原體,可以考慮用FQ-PCR檢測,為臨床診斷提供依據(jù)FQ-PCR對病原體的檢測克服了免i疫學檢測的“窗口期“問題,可判斷疾病是否隱性或亞臨床狀態(tài)。FQ-PCR技術可以應用于腫癟的研究及診斷。不同的核酸序列,哪怕僅有一個堿基的差異,也會體現(xiàn)在熔解溫度的差別上。
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實時熒光定量PCR的基本原理:理論上,PCR過程是按照2n(n代表PCR循環(huán)的次數(shù))指數(shù)的方式進行模板的擴增。但在實際的PCR反應過程中,隨著反應的進行由于體系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰減)使得靶序列并非按指數(shù)方式擴增,而是按線性的方式增長進入平臺期。因此在起始模板量與終點的熒光信號強度間沒有可靠的相關性。如采用常規(guī)的終點檢測法(利用EB染色來判斷擴增產物的多少,從而間接的判斷起始拷貝量),即使起始模板量相同經PCR擴增、EB染色后也完全有可能得到不同的終點熒光信號強度。廣州勱博--博日病毒核酸提取系統(tǒng)在PCR擴增中,溶液中的模板變性后低溫退火時,引物與探針同時與模板結合。
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隨著定量PCR儀設計上的不斷改進,對溫度控制的精密性越來越高,出現(xiàn)了像Rotor-Gene這樣的管間溫度均一性達±0.01℃的定量PCR儀,而該公司新近推出的Rotor-Gene6000更可達到±0.02℃的溫度分辨率。溫度上的高分辨率使得運用定量PCR儀進行高分辨率熔解曲線(HRM)分析基因型成為可能。高分辨率熔解曲線根據(jù)序列長度、GC含量和互補性分析樣品。不同的核酸序列,哪怕僅有一個堿基的差異,也會體現(xiàn)在熔解溫度的差別上。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯i仿相,中間層以及無色水相上層。
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PCR是1985年開始出現(xiàn)的一項基因檢測技術,由于PCR技術具有簡便易行、靈敏度高等優(yōu)點,該技術被廣泛應用于基礎研究,成為分子生物學必不可少的研究工具。但在許多情況下,研究者們已不再滿足于得知某一特異DNA序列的存在與否,他們更著眼于對其進行精i確的核酸定量。因而,借助PCR對基因快速、敏感、特異而準確的定量成為目前分子生物學技術研究的熱點之一。實時熒光定量PCR( real-time quantitative PCR, RQ PCR)技術實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,它以其特異性強、靈敏度高、重復性好、定量準確、速度快、全封閉反應等優(yōu)點成為分子生物學研究中的重要工具。根據(jù)其使用范圍可以分為兩類,一種是大型核酸提取儀,另一種是小型核酸提取儀。