博日養(yǎng)殖場(chǎng)熒光定量PCR的行業(yè)須知

廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括：非洲病毒檢測(cè)、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測(cè)、非洲檢測(cè)、全自動(dòng)核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測(cè)試劑盒。專門的熱循環(huán)儀配備熒光檢測(cè)模塊，用于監(jiān)測(cè)擴(kuò)增時(shí)的熒光，檢測(cè)到的熒光信號(hào)反映了每個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物的量。我們的客戶對(duì)象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)豬場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、生豬屠宰場(chǎng)。

廣州勱博--養(yǎng)豬場(chǎng)病毒核酸提取系統(tǒng)

一、在動(dòng)物檢疫中對(duì)生豬及其產(chǎn)品開展非洲病毒檢測(cè)，應(yīng)當(dāng)使用我部批準(zhǔn)或經(jīng)中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心比對(duì)符合要求的檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑盒（試紙條），確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。PCR技術(shù)是目前最i簡(jiǎn)單、快速的分子學(xué)檢測(cè)方法，但該方法的敏感性有限，因此以PCR為基礎(chǔ)的更新方法應(yīng)運(yùn)而生。符合要求的檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑盒（試紙條）可從中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心網(wǎng)站查詢。二、應(yīng)急期間，比對(duì)符合要求的檢測(cè)試劑盒（試紙條）可使用至2019年6月30日。三、各地畜牧獸醫(yī)管理部門要加強(qiáng)對(duì)非洲病毒檢測(cè)試劑盒（試紙條）生產(chǎn)企業(yè)及其產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)管，確保產(chǎn)品質(zhì)量符合要求。

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豬肉制品加工企業(yè)在生豬產(chǎn)品原料中檢出非洲病毒核酸陽性的，應(yīng)當(dāng)立即封存陽性樣品的同批次原料并報(bào)告所在地市場(chǎng)監(jiān)管、畜牧獸醫(yī)部門，并將陽性樣品送至具有檢測(cè)資質(zhì)的單位復(fù)檢。自動(dòng)化操作提高了工作效率，反應(yīng)快速、重復(fù)性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果清晰。復(fù)檢為陽性的，企業(yè)要在當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)監(jiān)管、畜牧獸醫(yī)部門監(jiān)督下，按規(guī)定對(duì)同批次生豬產(chǎn)品原料進(jìn)行無害化處理，對(duì)相關(guān)場(chǎng)所進(jìn)行徹i底清洗消毒。

廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括：非洲病毒檢測(cè)、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測(cè)、非洲檢測(cè)、全自動(dòng)核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測(cè)試劑盒。短距離可經(jīng)空氣傳播、污染的飼料、泔水、剩菜及肉屑、欄舍、車輛、器具和衣服等均可間接傳播本病。我們的客戶對(duì)象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)豬場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、生豬屠宰場(chǎng)。

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豬肉制品加工企業(yè)、生豬產(chǎn)品經(jīng)營(yíng)者采購(gòu)生豬產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)批批查驗(yàn)其動(dòng)物檢疫合格證明、肉品品質(zhì)檢驗(yàn)合格證明以及非洲病毒檢測(cè)結(jié)果（報(bào)告），確保購(gòu)進(jìn)的生豬產(chǎn)品不帶非洲病毒；采購(gòu)的進(jìn)口生豬產(chǎn)品應(yīng)附有合法的入境貨物檢驗(yàn)檢疫合格證明。注意：這里說的時(shí)間，不單純是消毒所用的時(shí)間，更重要的是病原體與消毒i藥接觸的有效時(shí)間。不得采購(gòu)沒有非洲病毒檢測(cè)結(jié)果（報(bào)告）及未經(jīng)檢疫或者檢疫不合格的生豬產(chǎn)品，確保豬肉制品和經(jīng)營(yíng)的生豬產(chǎn)品不含非洲病毒。

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所謂real-time Q-PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病，該病也是我國(guó)防范的一類動(dòng)物疫情。在real-time 技術(shù)的發(fā)展過程中，兩個(gè)重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用：（1）在90年代早期，Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn)，它能降解特異性熒光記探針，因此使得間接的檢測(cè)PCR產(chǎn)物成為可能。（2）此后熒光雙標(biāo)記探針的運(yùn)用使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時(shí)地監(jiān)測(cè)反應(yīng)全過程。這兩個(gè)發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運(yùn)用。

廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括：非洲病毒檢測(cè)、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測(cè)、非洲檢測(cè)、全自動(dòng)核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測(cè)試劑盒。常規(guī)PCR中，擴(kuò)增產(chǎn)物（擴(kuò)增子）是通過終點(diǎn)法來分析檢測(cè)，即PCR反應(yīng)結(jié)束后，DNA通過瓊脂糖凝膠電泳，然后進(jìn)行成像分析。我們的客戶對(duì)象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)豬場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、生豬屠宰場(chǎng)。

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非洲為何難以控制？非洲病毒基因組全長(zhǎng) 170～190 kb，為有囊膜的雙鏈 DNA 病毒，病毒粒子大小為 175～215 nm，呈正二十面體結(jié)構(gòu)，也是唯i一的蟲媒DNA病毒。一般用于mRNA轉(zhuǎn)錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數(shù)的測(cè)定、基因芯片結(jié)果驗(yàn)證、藥i效分析等。非洲病毒是一種急性、熱性、高度接觸性傳i染病，引起豬的死i亡率可達(dá)100％，并且非洲具有潛伏期，即使感i染病毒，但沒有臨床癥狀，就有可能通過非實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)關(guān)卡流入市場(chǎng)，進(jìn)而導(dǎo)致下游食品企業(yè)相關(guān)問題的出現(xiàn)。

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非洲與傳統(tǒng)相似且綜合癥狀復(fù)雜難辨，臨床上類似于急性，表現(xiàn)為高熱、皮膚充血、流i產(chǎn)、水腫和臟器出血。01℃的定量PCR儀，而該公司新近推出的Rotor-Gene6000更可達(dá)到±0。我國(guó)因之前不屬于非洲i疫情國(guó)家，因此沒有相關(guān)的針對(duì)性研究，目前采用的是原農(nóng)i業(yè)部檢疫所于1997年與美國(guó)梅島動(dòng)物病研究所共同研究的檢測(cè)方法，主要是PCR和ELISA，標(biāo)準(zhǔn)遵循GB/T 18648-2002非洲診斷技術(shù)。隨著相關(guān)檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，對(duì)于非洲的檢測(cè)方法也更加完善。PCR技術(shù)是目前i簡(jiǎn)單、快速的分子學(xué)檢測(cè)方法，但該方法的敏感性有限，因此以PCR為基礎(chǔ)的更新方法應(yīng)運(yùn)而生。

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非洲病毒的附著力到底有多強(qiáng)？直接接觸或者攜帶病毒的物品再次傳播的能力有多強(qiáng)？尚不清晰。Ct值的含義是：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。目前已知非洲是高度接觸性傳播的急性、烈性i病毒，主要通過接觸或采食受非洲病毒污染的物品，以及通過昆蟲吸血而傳i染。短距離可經(jīng)空氣傳播、污染的飼料、泔水、剩菜及肉屑、欄舍、車輛、器具和衣服等均可間接傳播本病。而且目前公認(rèn)ASFV對(duì)外界的抵抗力強(qiáng)，在自然條件下可以長(zhǎng)時(shí)間保持感i染性，可以在血液、糞便和各種組織中長(zhǎng)期保持感i染性。含有病毒的血液是該病發(fā)生傳播的重要因素。

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非洲（African Swine Fever，ASF）是由非洲病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）引起的一種急性、烈性、高度接觸性傳i染病，致死率100%。廣州勱博--養(yǎng)殖場(chǎng)核酸提取純化傳統(tǒng)的PCR定量是應(yīng)用終點(diǎn)PCR來對(duì)樣品中的模板量進(jìn)行定量,通常用凝膠電泳分離,并用熒光染色來檢測(cè)PCR反應(yīng)的最終擴(kuò)增產(chǎn)物。自2018年8月寧省沈陽市發(fā)生第i一起非洲i疫情起，目前全國(guó)已有29個(gè)省115個(gè)地方發(fā)生非洲i疫情，已撲殺數(shù)百萬頭生豬，直接經(jīng)濟(jì)損失數(shù)百億元。目前全世界都沒有有效的非洲i疫i苗進(jìn)行預(yù)防，現(xiàn)在有效的防控方法仍然是對(duì)非洲病毒進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，對(duì)發(fā)生疫情的地方嚴(yán)防死守，對(duì)疫點(diǎn)地區(qū)生豬全部撲殺，進(jìn)行無害化處理，防止疫情的擴(kuò)散。