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發布時間:2021-08-12 03:50  








免l疫印跡和檢測(所有步驟均在室溫下攪拌)
1.在電印跡步驟之后,將PVDF膜浸入100%甲l醇中15秒鐘,然后使其在室溫下干燥5分鐘。注意:如果使用硝l酸纖維素代替PVDF,則應跳過此步驟。
2.在室溫下不斷攪拌下,在TBST中用5%脫脂奶粉或3%BSA封閉膜1小時。
將膜與抗Arf 6兔多克l隆抗l體在5%脫脂奶粉或3%BSA / TBST中以1:50?1000(取決于樣品中Arf 6蛋白質的量)新鮮稀釋,孵育1-在室溫下持續攪拌2小時或過夜4oC。
3.用TBST將印跡的膜清洗3次,每次5分鐘。
4.將膜與二抗(例如山羊抗兔IgG,HRP偶聯物)一起孵育,在室溫下以恒定的比例在5%脫脂奶粉或3%BSA / TBST中以1:1000的比例新鮮稀釋。攪動。
5.用TBST將印跡的膜清洗3次,每次5分鐘。
6.使用您選擇的檢測方法,例如ECL。
電泳和轉膜
1. 取15ul樣品/孔上樣17%配體膠。
2. 按照制造商的說明進行SDS-PAGE。
3. 按照制造商的說明將凝膠蛋白轉到PVDF或硝化纖l維素膜。
免l疫印跡反應和檢測(所有步驟都是在室溫下進行,并不斷攪拌)
1. 將PVDF膜浸入100%甲l醇15s,然后在室溫放置5 min晾干。
注意:如果使用的是硝化纖l維素膜,此步省略。
2. 封閉:用TBST緩沖液配制5%的脫脂牛奶或者3%BSA在室溫下孵育1H進行封閉,并需要恒定振蕩。
3. 孵育一抗:用TBST緩沖液配制的5%脫脂牛奶或3%BSA稀釋特異性識別Cdc42活性構象的兔多克l隆抗l體(稀釋比例為1:50-1:1000,主要根據樣品中含有的Cdc42蛋白的量),室溫下孵育1-2小時,或者4°C條件下過夜孵育。
4. 用TBST緩沖液洗滌膜三次/5min。
5. 孵育二抗:(例如羊抗兔IgG-HRP),用TBST緩沖液配制的5%脫脂牛奶或3%BSA按1:1000稀釋比例稀釋后使用,室溫下孵育1小時并恒定振蕩。
6. 用TBST緩沖液洗滌膜三次/5min。
7. 使用實驗者所選擇的檢測方法進行顯色如ECL顯色法。
GTPases的Rab家族調節真核水泡膜運輸。 Rab35與兩個血漿
膜和內體定位,并涉及到包括T細胞受體回收,卵母細胞卵黃蛋白回收和胞質分裂在內的各種過程。 Rab35調節神經元樣細胞中的神經突生長,并可以誘導突起。
當前沒有直接測定法來測量Rab35 GTPases的活化。
NewEast Biosciences Rab35激l活檢測試劑盒基于特定于配置的單克l隆
特異性識別Rab35 GTP而不識別Rab Rab35 GDP的抗l體。鑒于...的高度親和力
抗原的單克l隆抗l體,可以在短時間內進行激l活測定。這個
分析提供了可靠的結果,并具有一致的可重復性。
這些抗Rab35 GTP單克l隆抗l體也可以用于監測大鼠Rab35的激l活。
1細胞和組織中的免l疫組織化學。
NewEast Biosciences Rab35激l活檢測試劑盒提供了一種簡單快速的方法來監測
Rab35的激l活。每個試劑盒均提供足夠的量以執行20個測定。
目前還沒有直接測定Arl1-gtpase活性的方法。NewEast Biosciences Arl1激l活檢測試劑盒是基于特定構型的單克l隆抗l體特異性識別Arl1 GTP,但不識別Arl1 GDP的抗l體。鑒于克l隆抗l體對其抗原,活化試驗可在短時間內進行。這個分析結果可靠,重現性一致。