EGFR(E746-A750)del推薦「多圖」

小G蛋白是從屬于細胞調節因子中的一個超家族。Rho家族是小G蛋白中的一個亞家族，它在細胞運動、細胞分裂以及基因轉錄中發揮主要作用。而本試劑盒中的Cdc42就屬于Rho亞家族中的一種， Cdc42參與生理活動過程中其分子結構會呈現出2種相互轉換的形式：與GTP結合的激l活狀態和與GDP結合的非活性狀態。

目前Cdc42蛋白活性的檢測主要是依據小GTP酶Cdc42可以與p21活化激酶（PAK）的p21結合區域（PBD）結合，使PAK活化從而發揮生物學功能，進而間接的進行Cdc42活性l功能的監測。然而此方法在檢測過程中存在著一定的局限性比如GTP水解成GDP的速度過快以及Cdc42-GTP結合蛋白與p21結合區域之間較低的親和力，導致這種檢測方法的重復性較差。

試劑盒成分

特異性識別Cdc42活性構象的鼠單克l隆抗l體（Anti-active Cdc42, Mouse MonoclonalAntibody (Catalog No. 26905)）：小管裝--30ul (抗l體濃度是1mg/ml)，抗l體溶于PBS（pH7.4）并包含50%的甘油和0.05%的疊氮l化鈉。此抗l體可以特異性識別所有脊椎動物中的Cdc42-GTP。

Protein A/G agarose (Catalog No. 30301) ：小管裝—400ul包含200ul Protein A/G agarose     和200ul 20%乙醇溶液。（使用時溶液需要充分混勻，再吸取）

5X Assay/Lysis Buffer (Catalog No. 30303)：小瓶裝—30mL包含250 mM Tris-HCl (pH 8.0),     750 mM NaCl, 50 mM MgCl2, 5 mM EDTA, 5% Triton X-100。

特異性識別Cdc42活性構象的兔多克l隆抗l體（Anti-Cdc42, Rabbit Polyclonal Antibody  (Catalog No.21010)）：小管裝--30ul (抗l體濃度是1mg/ml)，抗l體溶于PBS（pH 7.4）并包含有   50%的甘油。

100 X GTPγS (Catalog No. 30302) ：小管裝—100ul (10 mM) ，實驗中0.5mL細胞裂解液使用      5ul GTPγS標記。

100 X GDP (Catalog No. 30304) ：小管裝—100ul (100 mM) ，實驗中0.5mL細胞裂解液使用5ul GDP標記。

檢測步驟

Ι。活性Cdc42 Pull-Down實驗

1. 等分0.5-1 mL的細胞裂解物至微量離心管中。

2. 向管中加入1mL的1X Assay/Lysis 緩沖液。

3. 向管中加入1ul的活性Cdc42單克l隆抗l體。

4. 用渦旋振蕩儀將protein A/G凝膠柱充分混勻，然后快速的吸出20ul懸浮珠漿液加入離心管中。

5. 將管置于4°C條件下孵育1H，并輕輕的進行搖動。

6. 5000g，離心1分鐘。

7. 棄上清，這一步要非常小心以避免珠子的損失。

8. 用0.5 mL的1X Assay/Lysis緩沖液洗滌珠子三次，離心并棄去上清。

9. 后一次洗滌后，小心的移去所有的上清。

10. 用20ul的2X SDS-PAGE樣品緩沖液重懸樣品。

11. 樣品煮沸5min。

12. 5000g，離心10s。

基因符號：RAB11

說明：抗活性Rab11小鼠單克l隆抗l體

背景：Rab系列的小GTP酶是控制膜運輸的機械的關鍵要素。 Rab11已顯示可控制通過回收內體的運輸。

免l疫原：活性Rab11的重組全長蛋白

應用范圍：IP，IHC

推薦的稀釋液：IP：1μg，用于1?2 mg總細胞蛋白

IHC：1：50?100稀釋

濃度：1 mg / ml

格式：液體

同種型：IgG2b

純度：從腹l水中純化

存儲緩沖區：

防腐劑：否

成分：PBS（不含Mg2 和Ca2 ），pH 7.4、150 mM NaCl，50％甘油

種屬反應性：抗活性Rab11抗l體識別來自脊椎動物的活性Rab11。

儲存條件：儲存于-20°C。 避免凍結/解凍周期