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發布時間:2020-07-14 11:06  





PCR儀
簡單的說,PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖拷貝。目前常用的技術,可以將一段基因拷貝為原來的一百億至一千億倍。根據DNA擴增的目的和檢測的標準,可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實時熒光定量PCR儀四類。
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PCR儀的改進與完善
Mullis起初使用的DNA聚合酶是 DNA 聚合酶 I 的Klenow片段,1988年初,Keohanog改用T4 DNA聚合酶進行PCR,其擴增的DNA片段很均一,真實性也較高,只有所期望的一種DNA片段。但每循環一次,仍需加入新酶。1988年Saiki 等從溫泉中分離的一株水生嗜thermus aquaticus 中提取到一種耐熱DNA聚合酶。
此酶具有以下特點:
①耐高溫,在70℃下反應2h后其殘留活性大于原來的90%,在93℃下反應2h后其殘留活性是原來的60%,在95℃下反應2h后其殘留活性是原來的40%。
②在熱變性時不會被鈍化,不必在每次擴增反應后再加新酶。
③大大提高了擴增片段特異性和擴增效率,增加了擴增長度2.0Kb。由于提高了擴增的特異性和效率,因而其靈敏性也大大提高。為與大腸多聚酶IKlenow片段區別,將此酶命名為TaqDNA多聚酶Taq DNAPolymerase。此酶的發現使PCR廣泛的被應用。
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PCR儀的分類
實時熒光定量PCR儀
在普通PCR儀的基礎上增加一個熒光信號采集系統和計算機分析處理系統,就成了熒光定量PCR儀。其PCR擴增原理和普通PCR儀擴增原理相同,只是PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統得出量化的實時結果輸出。把這PCR儀叫做實時熒光定量PCR儀(qPCR儀)。熒光定量PCR儀有單通道,雙通道,和多通道。當只用一種熒光探針標記的時候,選用單通道,有多熒光標記的時候用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記的目的基因表達產物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。該儀器主要用于醫學臨床檢測,生物醫研發,食品行業,科研院校等機構。
PCR儀產品特點
優化的溫控模式,升降溫速度快,溫控準確,熱,儀器壽命更長。一機多用:兼容0.2ml,0.5ml管,96標準微孔板。無油熱蓋調節方便,徹底防止蒸發。儀器操作簡便,人機界面友好。體積小,重量輕,節省實驗室空間。