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發布時間:2021-10-27 05:06  





ELISA試劑盒的測定原理
測定技術的基礎在于抗原之間的特異結合反應,所以任何的診斷劑離不開好的原料,如抗原,酶等。以前用于測定的抗原通常為各種純化抗原,而則為純化抗原動物后獲得的多和使用雜交瘤技術得到的,而抗原或的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成方法制備。近年來,隨著分子生物學的發展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或及其酶結合物等測定試劑幾成為現實的新一代試劑,各種新型使用的測定方法也不斷出現。
ELISA試劑盒的應用技術
ELISA檢測試劑盒應用定性夾心檢測技術,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,這些就會與HEV 的多肽抗原結合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結合物,經第二次孵育后,酶結合物就會與孵育結合上的HEV IgM相結合,洗板除去未結合的酶結合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發生酶-底物反應,只有那些含有HEV IgM和酶結合物所形成的復合物的孔才會發生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應,并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgMelisa試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。
Elisa試劑盒操作注意事項
1.Elisa試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按污染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。