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發(fā)布時(shí)間：2020-12-31 10:19
Tris緩沖液不僅被廣泛用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑，還有許多重要用途。Tris被用于不同pH條件下的蛋白質(zhì)晶體生長(zhǎng)。Tris緩沖液的低離子強(qiáng)度特點(diǎn)可用于線蟲核纖層蛋白的中間纖維的形成。Tris也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一，其在電泳緩沖液中與甘氨酸構(gòu)成緩沖體系，穩(wěn)定電泳過程中的PH。Tris還是制備表面活性劑、硫化促進(jìn)劑和一些的中間物。Tris也被用作滴定標(biāo)準(zhǔn)物。 作為蛋白緩沖液時(shí)，若后續(xù)工作需要質(zhì)譜，則不適宜用Tris，換成其他質(zhì)譜儀可耐受的緩沖液。
提到緩沖液就不得不延伸一下，這就是Henderson-Hasselbalch方程。
在前面提到，
將等式同時(shí)取對(duì)數(shù)，并簡(jiǎn)化就可以得到：
或者
這就是Henderson-Hasselbalch方程。
注意：式子中酸及其共軛堿的濃度都是平衡時(shí)的濃度，除了酸性過于強(qiáng)的情況下，由于同離子效應(yīng)的存在，一般都可用此式計(jì)算。
此外，一些緩沖體系對(duì)溫度非常敏感，例如Tris-HCl緩沖液，如果你在25℃時(shí)將緩沖體系調(diào)至pH值8，pH值將在5℃時(shí)增加到8.58而在37℃時(shí)降到7.71。所以，如果打算在4℃條件下保存蛋白或在37℃進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，就應(yīng)該考慮到室溫下調(diào)的pH值可能在實(shí)驗(yàn)條件中就不適用了。 其他類型的色譜分離柱，如凝膠過濾柱和Ni2 親和層析柱，可能需要更高的鹽濃度。我一般用高達(dá)500 mM NaCl進(jìn)行高鹽淋洗，以防止蛋白和柱之間的非特異性結(jié)合。
