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熒光顯微鏡的原理是什么

熒光顯微鏡的原理 濾色塊是熒光顯微鏡的重要部位，其核心部件由激發光濾（firstbarrierfilter）、發射光濾（secondbarrierfilter）和半透半反濾(beam-splittingmirror)組成。 1．激發光濾及發射光濾：根據光源和熒光色素的特點，通常選用以下三類配套，提供一定波長范圍的激發光，并使樣品激發出的熒光透過，到達目鏡成像，此為其成像的原理。 紫外光激發：激發光濾可使紫外光透過，阻擋400nm以上的可見光通過。與之相應的發射光濾可允許藍光通過，視野內的光呈藍色，如應用于DAPI染色。 藍光激發：激發光濾可使藍光通過，阻擋其他波段的光。與之相應的發射光濾可允許綠光通過，如GFP染色標記。 綠光激發：激發光濾使綠光通過，阻擋其他波段的光。與之相應的發射光濾通常可允許紅光通過，如Rhodamine染色。 2．半透半反濾：它的作用是完全阻擋激發光通過，而將其反射；并透過相應波長范圍的發射光。其型號與激發光濾和發射光濾相對應。 3.光路：光線在熒光濾色塊中的傳播光路為：反射光濾光片只允許光源中特定波長的光線透過，這部分激發光到達半透半返濾時被反射后通過物鏡照射到樣品上，樣品中的熒光基團被激發光激發，發射出長波長的熒光；發射光通過物鏡，透過半透半反濾，到達發射光濾，此時又只有特定波長的光線透過，通過目鏡被我們肉眼看到的就是樣品中的熒光了。

熒光顯微鏡的光學系統原理圖

熒光顯微鏡是利用一個高發光效率的點光源，經過濾色系統發出一定波長的光(如紫外光3650入或紫藍光4200入)作為激發光、激發標本內的熒光物質發射出各種不同顏色的熒光后，再通過物鏡和目鏡的放大進行觀察。這樣在強烈的對襯背景下，即使熒光很微弱也易辨認，敏感性高，主要用于細胞結構和功能以及化學成分等的研究，這個是其工作原理。 下圖是熒光顯微鏡的光學系統原理圖。由燈發出的各種譜線的光線，經激發濾光片后只讓某一種波長的紫外光線通過，如波長為404.7nm藍紫光，經反光鏡后，激發樣品產生熒光。激發濾光片將其他波長的光線濾掉，并使樣品激發熒光，所以稱其為激發濾光片。通常，激發產生的熒光波長比激發樣品的光的波長大得多，是可見光。這樣產生的熒光和透過樣品的一部分激發光(紫外光)，經物鏡成像后，人眼即可用目鏡觀察熒光圖像。為了防止紫外光進入目鏡視場，降低圖像襯度和損傷人眼，放置了一塊截止濾光片，它只讓某一部分波長的譜線通過，如只讓500～750nm的可見光通過，而不讓500nm以下的光通過。

金相顯微鏡的調節工作距離

放大率和有效放大率： 金相顯微鏡的參數 由于經過物鏡和目鏡的兩次放大，所以金相顯微鏡總的放大率Γ應該是物鏡放大率β和目鏡放大率Γ1的乘積：Γ=βΓ1，顯然，和放大鏡相比，金相顯微鏡可以具有高得多的放大率，并且通過調換不同放大率的物鏡和目鏡，能夠方便地改變顯微鏡的放大率。 焦深： 焦深為焦點深度的簡稱，即在使用金相顯微鏡時，當焦點對準某一物體時，不僅位于該點平面上的各點都可以看清楚，而且在此平面的上下一定厚度內，也能看得清楚，這個清楚部分的厚度就是焦深。這點在視頻顯微鏡中尤為重要。 視場直徑： 觀察金相顯微鏡時，所看到的明亮的圓形范圍叫視場，它的大小是由目鏡里的視場光闌決定的。視場直徑也稱視場寬度，是指在顯微鏡下看到的圓形視場內所能容納被檢物體的實際范圍。視場直徑愈大，愈便于觀察。 覆蓋差： 金相顯微鏡的光學系統也包括蓋玻片在內。由于蓋玻片的厚度不標準，光線從蓋玻片進入空氣產生折射后的光路發生了改變，從而產生了相差，這就是覆蓋差。覆蓋差的產生影響了金相顯微鏡的成響質量。 工作距離： 工作距離也叫物距，即指物鏡前透鏡的表面到被檢物體之間的距離。鏡檢時，被檢物體應處在物鏡的一倍至二倍焦距之間。因此，它與焦距是兩個概念，平時習慣所說的調焦，實際上是金相顯微鏡的調節工作距離。

顯微鏡如何實現測量功能

顯微鏡如何實現測量功能： 1、通過分劃目鏡進行測量，分劃目鏡的刻度尺寸是0.1mm，通過對應的物鏡倍率那判斷實際物體的尺寸，比如物鏡是5X，目鏡刻度是12格，那么物方尺寸=(12x0.1)/5=0.24mm，該測量方式精度一般，測量行程必須在視場大小內。 顯微鏡 2、通過平臺進行測量：顯微鏡通過配置XY通過數顯微分頭控制移動的XY數顯移動平臺進行測量，測量精度可以達到0.001mm，測量行程和數顯微分頭對應，一般多為0-25mm。 3、通過測量分析軟件進行測量：通過顯微鏡連接電腦，配置分析軟件來進行測量，該測量方式精度高，認為誤差小，測量方便快捷，特別適合微小尺寸的檢測，目前已經成為顯微鏡測量的主要方式。