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什么是熒光顯微鏡？

熒光顯微鏡也是光學顯微鏡的一種，主要的區(qū)別是二者的激發(fā)波長不同。由此決定了熒光顯微鏡與普通光學顯微鏡結(jié)構(gòu)和使用方法上的不同。

熒光顯微鏡是熒光細胞化學的基本工具。它是由光源、濾板系統(tǒng)和光學系統(tǒng)等主要部件組成。是利用一定波長的光激發(fā)標本發(fā)射熒光，通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標本的熒光圖像。

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熒光顯微鏡——物鏡

各種物鏡均可應(yīng)用，但盡量用消色差的物鏡，因其自體熒光極微且透光性能(波長范圍)適合于熒光。由于圖像在顯微鏡視野中的熒光亮度與物鏡鏡口率的平方成正比，而與其放大倍數(shù)成反比，所以為了提高熒光圖像的亮度，應(yīng)使用鏡口率大的物鏡。尤其在高倍放大 時其影響非常明顯。因此對熒光不夠強的標本，應(yīng)使用鏡口率大的物鏡，配合以盡可能低的目鏡。

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熒光顯微鏡的標本制作要求

1、載玻片

載玻片厚度應(yīng)在0.8~1.2mm之間，太厚的坡片， 一方面光吸收多，另一方面不能使激發(fā)光在標本上聚集。載玻片必須光潔，厚度均勻，無明顯自發(fā)熒光。有時需用石英玻璃載玻片。

2、蓋玻片

蓋玻片厚度在0.17mm左右，光潔。為了加強激發(fā)光 ，也可用干涉蓋玻片，這是一種表面鍍有若干層對不同波長的光起到不同干涉作用的物質(zhì)(如氟化鎂)的蓋玻片，它可以使熒光順利通過，而反射激發(fā)光，這種反射的激發(fā)光可激發(fā)標本。

3、標本

組織切片或其他標本不能太厚，若太厚激發(fā)光大部分消耗在標本下部，而物鏡直接觀察到的上部不充分激發(fā)。另外，細胞重疊或雜質(zhì)掩蓋，影響判斷。

4、封裱劑

封裱劑常用甘油，必須無自發(fā)熒光，無色透明，熒光的亮度在pH8.5~9.5時較亮，不易很快褪去 。

5、鏡油

一般暗視野熒光顯微鏡和用油鏡觀察標本時，必須使用鏡油，盡量使用無熒光鏡油，也可用上述甘油代替，液體石蠟也可用，只是折光率較低，對圖像質(zhì)量略有影響。

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