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等溫核酸試劑盒

試劑盒使用示例

試劑盒的產生正是為了使實驗人員能夠擺脫繁重的試劑配制及優化過程，所以試劑盒中一般配備有相應的使用說明書，用戶按照說明書不需或只需少量的優化即可得到滿意的結果。

⑴試劑盒使用說明書

說明書一般包括公司標志及名稱、試劑盒名稱、試劑盒組成、保質期、使用領域、使用方法等項目

①一般在頁眉頁腳處為公司的名稱及標志；

②接下來為試劑盒的名稱；

③試劑盒組成中應為試劑盒中的所有內容，為了簡潔明了，一般以表格的形式表現；

④操作步驟是試劑盒說明書中很重要的部分，內容應準確、簡潔、易懂，不能包含帶有歧義的句子，更不能含糊其辭，排版上操作步驟應將復雜的步驟拆解，使人一目了然。

核酸試劑盒是如何工作的？

病毒獨特的基因序列被設定為檢測靶點，通過對檢測樣本進行PCR擴增，因PCR反應模板僅為DNA，因此在進行PCR反應前，應將新型冠狀病毒核酸（RNA）逆轉錄為DNA，使靶點的DNA序列指數級增加，每一個擴增出來的DNA序列都可以于預先加入的熒光標記探針結合，產生熒光信號，擴增出來的靶點基因越多，累積的熒光信號就越強（就好比演唱會如果只有一個粉絲搖熒光棒很不顯眼，如果大家一起搖那就嗨了）。如果樣本中沒有該病毒，自然也就檢測不到熒光信號的增強了。

核酸試劑盒

RPA技術主要依賴于三種酶：能結合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應溫度在37°C左右。

重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發生鏈交換反應形成并啟動DNA合成，對模板上的目標區域進行指數式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非常快，一般可在十分鐘之內獲得可檢出水平的擴增產物。RPA擴增的基礎體系(TwistAmp? Basic)含有DNA擴增所需的所有試劑，我們只要準備好引物和模板就行。擴增結果可以通過凝膠電泳進行終點檢測，產物純化后可用于下游研究。

在這個基礎體系中添入不同的酶和探針，就可以實現多樣化的RPA應用。舉例來說，TwistAmp? exo結合了exo探針技術和核酸外切酶III，能實現數據的實時讀取，就像熒光定量PCR一樣。不過反應終點的擴增子總量有所減少，適合獲得強熒光信號進行動力學分析，不適合終點檢測(比如跑膠)。將exo探針技術、核酸外切酶III和逆轉錄酶結合起來，可以一步實現RNA模板的實時擴增。

RPA是什么？

自PCR技術誕生以來已經有三十年了。從經典PCR、實時定量PCR再到現在的數字PCR，這一技術在不斷蛻變卻從未淡出我們的視野。英國TwistDx Inc公司開發的重組酶聚合酶擴增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術。以此為基礎的TwistAmp? 核酸擴增產品，能夠在15分鐘內進行常溫下的單分子核酸檢測。該技術對硬件設備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫、食品安全、生物防御和農業等領域。