原位雜交檢測電話 武漢思特進

原位雜交試驗

收集斑馬魚的胚胎，在Holfretor水中培養，到達所需要的發育時期時，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小時后用50%甲6醇2%多聚甲醛溶液洗，然后換成甲9醇，在-20C 保存，待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用雙氧6水處理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養，可阻斷色素的形成)

多種探針標記檢測系統

基于地高3辛、生物素和熒光標記分子的標記和檢測系統是常見的原位雜交檢測方法。

熒光標記檢測常為直接探針標記方法，如在dUTP/UTP/ddUTP上連接Fluorescein后進行核酸標記。由于標記在核酸上的熒光分子必須經受雜交和洗脫過程中的考驗，以及熒光分子易于衰減，其檢測靈敏度受到一定的影響。但對熒光分子的直接檢測呈現的背景較低。

雜交液中的陽離子濃度通過靜電排斥作用影響了雜交體之間的鏈穩定性，較高的鹽濃度將增加雜交體的穩定性。大于0.4M的Na離子濃度，對Tm值、雙鏈復性速率的影響不大，但隨著Na離子濃度的降低，將顯著影響Tm值和雙鏈復性速率。

有2機溶2劑（甲酰胺）的作用是降低DNA-DNA和DNA-RNA等雙鏈體的解鏈溫度。通常DNA需要在0.1~0.2M Na 90~100℃的條件下變性，那么應用于原位雜交，樣品必須在65~75℃的條件下進行長時間變性，這將導致樣品形態學的破壞。50%甲酰胺的應用能將雜交溫度降至30~45℃。

硫酸葡聚糖具有很強的水合性，高濃度的硫酸葡聚糖會使得核酸分子無法獲得周邊親水環境，增加了探針濃度，加快雜交反應速率。

多彩色熒光原位雜交技術：顯而易見，是熒光原位雜交的升級版，采用多個熒光來檢測，目前的發展及運用也是較多的。

原位PCR：將原位雜交結合PCR技術發展起來的實驗方法。

基因組原位雜交技術：該技術在我們的領域可能運用的畢竟少，主要是根據物種DNA同源性差異實現，在農作物等的雜交育種上運用較廣，

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