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目前商業化提供的一些cAMP檢測試劑盒主要應用ELISA的方案，使用的是非親和純化的cAMP多克l隆抗l體，盡管具有靈敏性，這些多克l隆抗l體與ATP存在一定程度的交叉反應?；贏TP是cAMP生產的底物，很有必要找到一種能高特異性識別cAMP的抗l體。

紐斯特生物開發出了鼠單克l隆抗l體的cAMP ELISA 檢測試劑盒。該單克l隆抗l體對cAMP的特異性比cAMP、ATP等類似的小分子高出108 倍以上。相較于其他的多克l隆抗l體cAMP試劑盒，紐斯特生物cAMP ELISA試劑盒能顯著的提高其靈敏性和特異性，且能有效避免來自動物多克l隆抗l體的批次間差異， 因此可以提供長久有效地可重復性定量檢測。

本試劑盒利用競爭酶聯免l疫分析方法來測定細胞提取物或體外腺苷酸環化酶實驗中的cAMP的水平。簡而言之，將羊抗鼠多克l隆抗l體包被在酶標板上，細胞提取物或體外腺苷酸環化酶實驗中的cAMP與固定數量的偶聯辣根過氧化物酶的cAMP或堿性磷酸酶競爭性的結合抗cAMP單克l隆抗l體，已知的cAMP作為標準品來做標準曲線。經過一段時間孵育，洗掉所有試劑，加入底物進行顯色。將多孔板置于酶標l儀上，于450nm或405nm波長下，進行讀數。黃色的光強度與樣品中cAMP的濃度呈反比關系?；赾AMP標準品所得曲線，通過測得的光密度可以計算出樣品中cAMP的濃度。

實驗步驟

使用前將各種試劑取出放置30分鐘，平衡至室溫。所有標準品和樣品必需設置平行對照實驗。

快速加入試劑至樣品中，立即漩渦震蕩2秒混勻。

1. 依據實驗鍵盤紙決定酶標條的使用量，將剩余的酶標條連同干燥劑一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μL中和液至各個微孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特異結合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP標準品)。

4. 移取100μL cAMP標準品至相應的孔。

5. 移取100μL樣品至相應的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特異結合)孔。7. 移取50μL 偶聯酶至各孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

8. 移取50μL 抗l體工作液至各孔中，除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特異結合)孔。

9. 將酶標孔置于孔板振動器上，250~500rpm，室溫孵育2小時。

10. 在吸水紙上拍干微孔內溶液，加洗滌液400μL每孔洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗滌，清空各微孔，在干凈的無塵吸水紙上輕巧酶標板數次，以確保沒有洗滌液殘留。

12. 加5μL 偶聯酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL顯色底物溶液，于室溫靜置5~30分鐘。（顯色底物A和B需在臨用前15分鐘內等體積混合，并避光放置。）

14. 每孔加入50μL終止液。終止后立即讀數。

15. 清除酶標l儀Blank(空白)孔值，讀取450nm處的光密度值，在570nm至590nm之間有修正。如果酶標l儀不能自動清除Blank(空白)孔值，那么手動扣除每個讀數的Blank(空白)孔光密度值。

武漢紐斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美國生命科學試劑供應商美國NewEastBio在中國的子公司。.美國NewEastBio專注于生命科學和生物技術領域，主要產品有小分子、ELISA試劑盒、蛋白等，與世界高校和研究所、世界大制藥公司、生物科技公司和醫院等客戶建立了長期穩定的合作關系，產品銷往全球。

cGMP作為獨特的第二信使，可調節細胞對各種外源和內源信號分子的反應。 cGMP主要通過激l活蛋白激酶、控制特定的離子通道、磷酸二酯酶調節細胞環核苷酸濃度來調節不同的生理過程（8），如血管平滑肌松弛、上皮細胞電解質運輸、骨生長、白細胞遷移、軸突引導、精l子運動、血小板蔓延以及血管通透性等（1-9）。