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{微生物檢測(cè)}常規(guī)鑒定技術(shù)

{微生物檢測(cè)}常規(guī)鑒定技術(shù)一

(一)形態(tài)結(jié)構(gòu)和培養(yǎng)特性觀察

1、微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察主要是通過(guò)染色，在顯微鏡下對(duì)其形狀、大小、排列方式、細(xì)胞結(jié)構(gòu)(包括細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、鞭毛、芽孢等)及染色特性進(jìn)行觀察，直觀地了解細(xì)菌在形態(tài)結(jié)構(gòu)上特性，根據(jù)不同微生物在形態(tài)結(jié)構(gòu)上的不同達(dá)到區(qū)別、鑒定微生物的目的。在厭氧微生物的培養(yǎng)過(guò)程中，zui重要的一點(diǎn)就是要除去培養(yǎng)基中的氧氣。

2、細(xì)菌細(xì)胞在固體培養(yǎng)基表面形成的細(xì)胞群體叫菌落(colony)。不同微生物在某種培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖，所形成的菌落特征有很大差異，而同一種的細(xì)菌在一定條件下，培養(yǎng)特征卻有一定穩(wěn)定性。有時(shí)為了更有效地分離某些yanyangjun，可以把所分離的樣品接種于培養(yǎng)基上，然后再把培養(yǎng)皿放在完全密封的厭氧培養(yǎng)裝置中。以此可以對(duì)不同微生物加以區(qū)別鑒定。因此，微生物培養(yǎng)特性的觀察也是微生物檢驗(yàn)鑒別中的一項(xiàng)重要內(nèi)容。

抑菌效力

抑菌劑效力測(cè)定用培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查，包括成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按配制的培養(yǎng)基均應(yīng)檢查。

7.2試驗(yàn)所用的菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)5代（從保藏中心獲得的冷凍干燥為第0代），并采用適宜的保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。

銅綠假單胞菌     （Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC(B)10 104〕

大腸埃希菌        （Escherichia coli） 〔CMCC(B) 44 102〕

金黃色菌 （Staphylococcus aureus）〔CMCC(B)26 003〕

白色菌         （Candida albicans） 〔CMCC(F) 98 001〕

黑曲霉                （Aspergillus  niger） 〔CMCC(F)

98 003〕

抑菌效力-菌液制備

抑菌效力-菌液制備

取大腸埃希菌、金黃色putao球菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物用 pH7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成 適宜濃度的菌懸液。含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱(chēng)為混和培養(yǎng)物(mixedculture)。取表 2 黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加入 3～5ml 含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯80 的 pH7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯80 的 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的孢子懸液。

菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在 2 小時(shí)內(nèi)使用；若保存在 2～8℃，可在24 小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在 2～8℃，在驗(yàn)證過(guò)的貯存期內(nèi)使用。

微生物限度檢查

計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)中，采用平皿法或薄膜過(guò)濾法時(shí)，試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組菌落數(shù)的值與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)；采用MPN法時(shí)，試驗(yàn)組菌數(shù)應(yīng)在菌液對(duì)照組菌數(shù)的95%置信限內(nèi)。在進(jìn)行junzhong鑒定時(shí)，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物。若各試驗(yàn)菌的回收試驗(yàn)均符合要求，照所用的供試液制備方法及計(jì)數(shù)方法進(jìn)行該供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)。

   方法適用性確認(rèn)時(shí)，若采用上述方法還存在一株或多株試驗(yàn)菌的回收達(dá)不到要求，那么選擇回收接近要求的方法和試驗(yàn)條件進(jìn)行供試品的檢查。

   供試品檢查

   檢驗(yàn)量

   檢驗(yàn)量即一次試驗(yàn)所用的供試品量（g、ml或c㎡）。

   一般應(yīng)隨機(jī)抽取不少于2個(gè)zui小包裝的供試品，混合，取規(guī)定量供試品進(jìn)行檢驗(yàn)。

   除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗(yàn)量為10g或10ml；膜劑為100c㎡；貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗(yàn)量可以酌減。檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)從2個(gè)以上zui小包裝單位中抽取供試品，大蜜丸還不得少于4丸，膜劑還不得少于4片。

   供試品的檢查

   按計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的計(jì)數(shù)方法進(jìn)行供試品中需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的測(cè)定。

   胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于測(cè)定需氧菌總數(shù)；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于測(cè)定霉菌和酵母菌總數(shù)。

   陰性對(duì)照試驗(yàn) 以稀釋液代替供試液進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)，陰性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，如果陰性對(duì)照有菌生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)査。