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發布時間:2020-07-19 05:11  





武漢默沙克生物????科技有限公司是一家專門從事生物制劑研發與生產的企業。目前可提供各種抗1體、免疫學試劑盒、生化試劑、ELISA試劑盒、分子生物學試劑等多用途多屬種的高品質產品,服務涉及分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學領域。
5. 在無抗生1素的培養基中培養細胞一代。
6. 重復步驟4。
7. 在無抗生1素的培養基中培養4~6代,確定污染是否以已被消除。
我司分析細胞培養細胞培養技術也叫細胞克1隆技術,在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。不論對于整個生物工程技術,還是其中之一的生物克1隆技術來說,細胞培養都是一個必不可少的過程。
三.實驗材料
儀器設備:1.酒精燈、三角燒瓶,培養皿;2.鑷子、剪刀、剖針;3.雙筒解剖顯微鏡;4.光照培養箱或溫室;
材料煙1草無菌苗、豌豆幼苗。
試劑
(1)MS培養基,植物激1素:NAA、6-BA等;
(2)飽和漂液(次氯1酸鈉);
(3)70%酒精、100%酒精、酒精棉球;
(4)無菌水
四.實驗步驟
豌豆苗的莖尖培養
⑴取發芽6天的豌豆幼苗10株,簡取1厘米左右的莖尖,浸入70%的酒精中1分鐘,再浸入飽和次氯1酸鈉溶液中消毒15分鐘,(此步以后要求無菌)用無菌水中沖洗5次,在滅菌的濾紙上吸干水分,放入滅菌的培養皿中。
1、染色過強 原因 解決辦法 抗1體的濃度過高或抗1體孵育時間過長 降低抗1體滴度(一般指濃縮性抗1體)抗1體孵育時間:室溫1 小時或4℃過夜 孵育溫度過高,孵育溫度超過37℃ 一般室溫20-28℃ DAB 顯色時間過長或 DAB 濃度過高 顯色時間不能超過5-10分鐘,以顯微鏡下觀察為準 2、非特異性背景染色 原因 解決辦法 操作過程中沖洗不充分 每步沖洗3×5 組織中含過氧化物酶未阻斷 可再配置新鮮3%H2O2封閉,孵育時間延長 組織中含內源性生物素 正常非免疫動物血1清再封閉 血1清蛋白封閉不充分 延長血1清蛋白封閉時間
7. 包埋
包埋時,用鑷子夾取石蠟模子(金屬質地)在酒精燈上稍加熱,放在平的桌面上,從溫箱中取出盛放純石蠟的蠟杯,倒入少許石蠟。再將鑷子稍加熱,夾取材料將切面朝下放入蠟模中,排列整齊。再放上包埋盒,輕輕倒入熔蠟。
8. 切片
①將已固定和修好的石蠟塊裝在切片機的夾物臺上。
②將切片刀固定在刀夾上,刀口向上。
③搖動推動螺旋,使石蠟塊與刀口貼近,但不可超過刀口。
④調整石蠟塊與刀口之間的角度與位置,刀片與石蠟切片約成15度左右。
⑤調整厚度調節器到所需的切片厚度,一般為4-10微米。
⑥一切調整好后主可以開始切片。此時右手搖動轉輪,讓蠟塊切成蠟帶,左手持毛筆將蠟帶提起,搖轉速度不可太急,通常以40-50r/min。