實驗室微生物檢測常用解決方案【世紀久?！?/h1>

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微生物計數

1.血細胞計數法

將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上，在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數，并求出每個小格所含細菌的平均數，再以此為依據，估算總菌數。

①此法的缺點是不能區分死菌和活菌。

②對壓在小方格界線上的細菌，應當取平均值計數。

③此法可用于測定培養液中酵母jun種群數量的變化

2.稀釋涂布平板法

原理:每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。

①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目

②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低，原因是當兩個活多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示。

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定。但不適于測定樣品中絲狀體微生物，例如放線jun或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等。

④此法若不培養成菌落，可通過將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上，經固定染色后在顯微鏡下計數，這樣又稱涂片計數法。染色可用臺盼藍，臺盼藍能使死細胞染成藍色，可分別計數死細胞和huo細胞。

微生物限度檢查

計數方法適用性試驗

   1.供試液制備

   根據供試品的理化特性與生物學特性，采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時，應均勻加熱，且溫度不應超過45℃。供試液從制備至加入檢驗用培養基，不得超過1 小時。

   常用的供試液制備方法如下。如果下列供試液制備方法經確認均不適用，應建立其他適宜的方法。

   （1）水溶性供試品 取供試品，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養基溶解或稀釋制成1：10供試液。若需要，調節供試液pH值至6～8。必要時，用同一稀釋液將供試液進一步10倍系列稀釋。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。因此，微生物培養特性的觀察也是微生物檢驗鑒別中的一項重要內容。

   （2）水不溶性非油脂類供試品 取供試品，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養基制備成1：10供試液。分散力較差的供試品，可在稀釋液中加入表面活性劑如0.1%的聚山梨酯80，使供試品分散均勻。若需要，調節供試液pH值至6～8。必要時，用同一稀釋液將供試液進一步10倍系列稀釋。——大腸gan菌簡介——大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)通常被稱為大腸gan菌，是Escherich在1885年發現的，在相當長的一段時間內，一直被當作正常腸道菌群的組成部分，認為是非致病菌。

   （3）油脂類供試品 取供試品，加入無菌十四烷酸異丙酯使溶解，或與zui少量并能使供試品乳化的無菌聚山梨酯80或其他無抑菌性的無菌表面活性劑充分混勻。表面活性劑的溫度一般不超過40℃（特殊情況下，zui多不超過45℃），小心混合，若需要可在水浴中進行，然后加入預熱的稀釋液使成1：10供試液，保溫，混合，并在zui短時間內形成乳狀液。必要時，用稀釋液或含上述表面活性劑的稀釋液進一步10倍系列稀釋。食源病原微生物可通過接觸物表面、水、土壤、空氣、排泄物、食物等媒介傳播，從而污染“從農田到餐桌”的食物鏈任何環節。

2.薄膜過濾法

   除另有規定外，按計數方法適用性試驗確認的方法進行供試液制備。取相當于1g、1ml或10c㎡供試品的供試液，若供試品所含的菌數較多時，可取適宜稀釋級的供試液，照方法適用性試驗確認的方法加至適量稀釋液中，立即過濾，沖洗，沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養基或沙氏葡萄糖瓊脂培養基上培養。30-2010食品安全標準食品微生物學檢驗單核細胞增生李斯特氏菌檢驗GB4789。

   培養和計數 培養條件和計數方法同平皿法，每張濾膜上的菌落數應不超100cfu。

   菌數報告規則 以相當于1g、1ml或10c㎡供試品的菌落數報告菌數；若濾膜上無菌落生長，以<1報告菌數（每張濾膜過濾1g、1ml或10c㎡供試品），或<1乘以zui低稀釋倍數的值報告菌數。