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首先，什么是緩沖溶液？緩沖液（Buffer solution）通常是由「弱酸及其共軛堿」或「弱堿及其共軛酸」緩沖對所組成的溶液，能夠在加入一定量其他物質(zhì)時減緩pH的改變。以生物實驗中的一種緩沖液PBS為例，是由Na2HPO4、KH2PO4組成的緩沖對，在PH5.8-8.0范圍內(nèi)有較強的緩沖能力。

01、緩沖原理

假設(shè)緩沖溶液里含有弱酸HA以及它的共軛堿  。

而生化實驗室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、酸、Tris（三羥甲基氨基甲烷）等系統(tǒng)，生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系，因為有時影響實驗結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值，而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學(xué)反應(yīng)。硼酸鹽：硼酸鹽與許多化合物形成復(fù)鹽、如蔗糖。檸檬酸鹽：檸檬酸鹽離子容易與鈣結(jié)合，所以存在有鈣離子的情況下不能使用。

 總的來說，TCEP是這三個還原劑中穩(wěn)定的，但它也是昂貴的。我通常在純化過程的緩沖液中添加DTT，在后保存酶液的緩沖液中添加TCEP。一般比較合理的還原劑濃度是5~10mM。基本上你要確保還原劑濃度要遠遠高于你的蛋白濃度。因為DTT和巰在室溫下就會降解，所以需要將添加了還原劑的緩沖液處于低溫保藏，或者在使用時再添加還原劑。