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發布時間:2021-09-01 10:16  
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高效液相色譜的歷史
1903年俄國植物化學家茨維特(Tswett)初次提出“色譜法”(Chromatography)和“色譜圖”(Chromatogram)的概念。茨維特使用色譜法 chromatography (來自希臘字, chroma 意思是顏色, graphy 意思是記錄 - 直譯為顏色記錄)來描述他的彩色試驗。(令人好奇的是, 俄羅斯名字茨維特意思是顏色。)1930年以后,相繼出現了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術。1952年,英國學者Martin和Synge 基于他們在分配色譜方面的研究工作,提出了關于氣-液分配色譜的比較完整的理論和方法,把色譜技術向前推進了一大步,這是氣相色譜在此后的十多年間發展十分迅速的原因。1958年,基于Moore和Stein的工作,離子交換色譜的儀器化導致了氨基酸分析儀的出現,這是近代液相色譜的一個重要嘗試,但分離效率尚不理想。1960年中后期,氣相色譜理論和實踐發展,以及機械、光學、電子等技術上的進步,液相色譜又開始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學鍵合固定相用于液相色譜就出現了HPLC。1970年中期以后,微處理機技術用于液相色譜,進一步提高了儀器的自動化水平和分析精度。1990年以后,生物工程和生命科學在國際和國內的迅速發展,為高效液相色譜技術提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題,如人類基因組計劃,蛋白質組學有HPLC作預分離等。
HPLC概述
高效液相色譜法(HPLC)是上個世紀七十年代迅速發展起來的一項高效、快速的分析分離技術,是現代分離測試的重要手段。
色譜法的分離原理是:溶于流動相(mobile phase)中的各組分經過固定相時,由于與固定相(station phase)發生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強弱不同,在固定相中滯留時間不同,從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。
HPLC是在經典的液相色譜法基礎上發展起來的,其以液體作為流動相,并采用顆粒極細的高效固定相的柱色譜分離技術。其分離機制與常規柱色譜相同,但填料更加精細,需高壓泵推動,柱效高,分析速度快。
與氣相色譜不同的是液相色譜中流動相亦參與組分的分離過程,其組成、比例和pH值可靈活調節,分離模式多樣。在實際操作中主要通過改變流動相的組成來調節樣品在色譜柱的保留值和選擇性,從而使不同樣品得到分離。
高效液相色譜法的應用范圍十分廣泛,對樣品的適用性廣,不受分析對象揮發性和熱穩定性的限制,幾乎所有的化合物包括高沸點、極性、離子型化合物和大分子物質均可用高效液相色譜法分析測定,因而彌補了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機化合物中,可用氣相色譜分析的約占20% ,而80% 則需用高效液相色譜來分析。
高效液相色譜
高效液相色譜-質譜聯用技術是以液相色譜作為分離系統,質譜作為檢測系統,經純化后的樣品在液相色譜和質譜部分經過分離和離子化,經由檢測器得到質譜圖。液質聯用體現了色譜和質譜優勢的互補,結合了色譜對復雜樣品的高分離能力和質譜的高選擇性,高靈敏度及能夠提供相對分子量和結構信息的優點,在臨床檢驗、臨床研究領域有廣泛的應用。
液相色譜特點
液相色譜具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用,流出組分易收集等優點,因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、環境分析、無機分析等各種領域。高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。液相色譜-質譜連用技術受到普遍重視;液相色譜-紅外光譜連用也發展很快如在環境污染分析測定水中的烴類,海水中的不揮發烴類,使環境污染分析得到新的發展。使用高效液相色譜儀的領域很多,主要因為其靈敏度高、速度快等等優點。高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。