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發布時間：2021-03-25 23:25
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低溫生物菌種的保存方法有哪些？
（一）培養基保存法
利用各種斜面和半固體培養基，加上石蠟油保存菌種，是一種簡易的保存方法。
1.普通瓊脂斜面保存法：腸道菌、等一般細菌可接種于不含糖的普通瓊脂斜面上，斜面底部應加少許無糖肉膏湯，以防干涸。經35℃培養18～24h后，移種于4℃冰箱中，一般可保存一個月，每月傳代一次。
2.血液瓊脂斜面保存法：鏈球菌、應接種于血液瓊脂斜面上，35℃培養生長后，置4℃冰箱中保存，鏈球菌須半個月至1個月移種一次，新分離菌株須2～4天移種一次，以后逐漸延長移種時間，在適應后可延至半個月移種一次。
3.巧克力色斜面保存法：宜保存菌，并在35℃孵箱中保存，一般每2天移種一次。
4.雞蛋斜面保存法：適于保存含有Vi抗原的沙門菌屬及其他含表面抗原的細菌，一般可保存一個月。
5.半固體穿刺保存法：將細菌接種于瓊脂半固體或瓊脂半固體內，經35℃培養18～24h，再以無菌方法加入滅菌的液體石蠟。高度約lcm，置4℃冰箱保存。保存時間可達3～6個月。
（二）干燥保存法
原理是將細菌體內的水分蒸發掉，使其處于休眠和代謝停滯狀態，從而達到長期保存菌種的目的醫|學教|育網搜集整理。菌種干燥后低溫保存，可保存數年至十幾年。
（三）冷凍干燥保存法
本法又稱冷凍真空干燥法。它綜合利用了各種有利于菌種保存的因素（低溫、干燥和缺氧等），是目前有效的菌種保存方法之一。用本法保存的菌種具有成活率高，變異性小等優點，保存期一般3～5年，有的可長達10年以上。
（四）脫脂牛奶保存法
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低溫生物菌種的制備是什么？
將培養成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養基上，于25～28℃培養14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產上延續使用半年左右。放線孢子的培養基大多是采用麩皮或豌豆浸出液、牛肉膏及無機鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴大的扁瓶孢子培養基中,于28～37℃培養5～14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐 (6)的種子。如果有些生產菌種不產孢子，如赤霉產生菌或產孢子不多的,則可采用搖瓶（5）液體培養制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿等）,及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發酵罐(7)的種子應是生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
低溫生物菌種純化方法
1、傾注平板法
首先把微生物懸液通過一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40~50°左右的營養瓊脂培養基充分混合，然后把這混合液傾注到無菌的培養皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養。單一細胞經過多次增殖后形成一個菌落，取單個菌落制成懸液，重復上述步驟數次，便可得到純培養物 2、涂布平板法
首先把微生物懸液通過適當的稀釋，取一定量的稀釋液放在無菌的已經凝固的營養瓊脂平板上，然后用無菌的玻璃刀把稀釋液均勻地涂布在培養基表面上，經恒溫培養便可以得到單個菌落。3、平板劃線法
簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環取培養物少許在平板上進行劃線。劃線的方法很多，常見的比較容易出現單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、四格法等。當接種環在培養基表面上往后移動時，接種環上的菌液逐漸稀釋，然后在所劃的線上分散著單個細胞，經培養，每一個細胞長成一個菌落。
2、富集培養法
富集培養法的方法和原理非常簡單。我們可以創造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進行競爭，在生長能力方面遠遠超過其他微生物。所創造的條件包括選擇合適的碳源、能源、溫度、光、pH、滲透壓和氫受體等。在相同的培養基和培養條件下，經過多次重復移種，然后富集的菌株很容易在固體培養基上長出單菌落。如果要分離一些專性寄生菌，就必須把樣品接種到相應敏感宿主細胞群體中，使其大量生長。通過多次重復移種便可以得到純的寄生菌。
