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等溫核酸試劑盒

TwisAmp Liquid Exo說明

以靈活的液體形態進行實時熒光 RNA 擴增。若想要將 RPA 與 TwistDx 熒光 TwistAmp? exo 探針結合使用，則推薦使用本產品。除了基本的組分，還包含強大的核酸酶（核酸外切酶 III），該酶將在擴增反應期間處理 TwistAmp? exo 探針并產生實時讀出。用戶只需提供引物、探針、dNTP 和模板。

非常適用于：實時熒光 DNA 檢測，便于使用不同的 RPA 反應體積或改變組分比例

Product code: TALQEXO01

核酸試劑盒

LAMP:環介導等溫擴增法的特征是針對目標DNA鏈上的六個區段設計四個不同的引物然后再利用鏈置換反應在一定溫度下進行反應。反應只需要把基因模板、引物、鏈置換型DNA合成酶、基質等共同置于一定溫度下(60~65℃)、經一個步驟即可完成。

重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發生鏈交換反應形成并啟動 DNA合成，對模板上的目標區域進行指數式擴增。被替換的 DNA鏈與SSB結合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。

RPA技術主要依賴于三種酶：能結合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應溫度在37°C左右。

重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發生鏈交換反應形成并啟動DNA合成，對模板上的目標區域進行指數式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非?？?/span>，一般可在十分鐘之內獲得可檢出水平的擴增產物。RPA擴增的基礎體系(TwistAmp? Basic)含有DNA擴增所需的所有試劑，我們只要準備好引物和模板就行。擴增結果可以通過凝膠電泳進行終點檢測，產物純化后可用于下游研究。

在這個基礎體系中添入不同的酶和探針，就可以實現多樣化的RPA應用。舉例來說，TwistAmp? exo結合了exo探針技術和核酸外切酶III，能實現數據的實時讀取，就像熒光定量PCR一樣。不過反應終點的擴增子總量有所減少，適合獲得強熒光信號進行動力學分析，不適合終點檢測(比如跑膠)。將exo探針技術、核酸外切酶III和逆轉錄酶結合起來，可以一步實現RNA模板的實時擴增。