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蛋白質(zhì)結(jié)晶方法

結(jié)晶方法(Crystallization Techniques)1.1.1 分批結(jié)晶(Batch Crystallization) 這是老的簡單的結(jié)晶方法，其原理是同步地在蛋白質(zhì)溶液中加入沉淀劑，立即使溶液達(dá)到一個高過飽和狀態(tài)。幸運(yùn)的話，不需進(jìn)一步處理即可在過飽和溶液中逐漸長出晶體。一個用于微分批結(jié)晶的自動化系統(tǒng)已被Chayen等人設(shè)計(jì)出（1991，1992），其微分批方法中，他們在1-2μl包含蛋白質(zhì)和沉淀劑的液滴中生長晶體。液滴被懸浮在油（如石蠟）中，油的作用是作為封層以防止蒸發(fā)，它并不干擾普通沉淀劑，但是干擾能溶解油的(Chayen, 1997; see also Chayen, 1998)。

普通蛋白結(jié)晶板

在普通24孔板的基礎(chǔ)上發(fā)展出來用于結(jié)晶學(xué)研究。透明的PS材料，平整無變形的底提供了優(yōu)異的光學(xué)性能。孔緣突出于板面，減少孔間污染的風(fēng)險(xiǎn)。在“沉滴”（Sitting Drop）中，需要用到“微橋”（Micro-Bridges）,結(jié)晶過程中或之后，“微橋”可以轉(zhuǎn)移到另外一個孔。可用VIEWseal?（676070）密封，也可以用蓋玻片通過硅油密封每一孔。

用于油下結(jié)晶（Microbatch）,梯形的孔形可將樣品溶液集中于孔*，平的底部可在顯微鏡下觀察結(jié)晶的生長。

蛋白結(jié)晶板作用

隨著人類基因組測序計(jì)劃的完成 ,鑒定細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá),結(jié)構(gòu),功能及相互作用方式等成為后基因組時(shí)代的主要目標(biāo)之一.為此 ,需要高通量的蛋白質(zhì)組學(xué)研究的技術(shù)和方法.近年來出現(xiàn)的表面增強(qiáng)激光解吸 /電離，蛋白質(zhì)芯片技術(shù)是一種操作簡單 ,方便快捷 ,樣本需要量少 ,敏感性高 ,特異性強(qiáng)的高通量的研究蛋白組學(xué)的方法 ,在蛋白質(zhì)功能分析,標(biāo)志物篩選,研發(fā)等方面具有廣泛的應(yīng)用前景。

蛋白結(jié)晶板使用

蛋白質(zhì)是水產(chǎn)品的主要組分,其含量測定在水產(chǎn)品加工及研究等方面應(yīng)用極為廣泛.目前,各蛋白含量快速測定方法通常是在試管中進(jìn)行反應(yīng)并應(yīng)用分光光度計(jì)測定,其操作過程較繁瑣,分析大批量樣品時(shí)效率低,上述缺點(diǎn)在高通量篩選、檢測等場合尤為突出.為了克服該不足,實(shí)現(xiàn)蛋白含量的快速高通量測定,本研究基于Folin-酚法,利用96孔板作為反應(yīng)器并配合比色,建立了一種蛋白含量測定的微孔板方法并評價(jià)其合理性.該法測得樣品的蛋白含量與常規(guī)法結(jié)果無顯著性差異,反應(yīng)在30-90 min顯色穩(wěn)定,標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)R2=0.9922,標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為0.07%-0.78%,檢測限為10 μg.與常規(guī)法相比,微孔板法保持了Folin-酚法的準(zhǔn)確性及穩(wěn)定性,同時(shí)具有通量高、節(jié)省樣品、試劑及測定時(shí)間等優(yōu)點(diǎn),在蛋白高通量快速測定方面更具優(yōu)勢。