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{微生物檢測}微生物接種

將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養基上或活的生物體內的過程叫做接種。

接種和分離工具

1.接種針 2.接種環 3.接種鉤 4.5.玻璃涂棒 6.接種圈 7.接種鋤 8.小解剖刀

常用的接種方法有以下幾種：

1、劃線接種

這是zui常用的接種方法。即在固體培養基表面作來回直線形的移動，就可達到接種的作用。常用的接種工具有接種環，接種針等。在斜面接種和平板劃線中就常用此法。

2、三點接種

在研究霉菌形態時常用此法。此法即把少量的微生物接種在平板表面上，成等邊三角形的三點，讓它各自獨立形成菌落后，來觀察、研究它們的形態。除三點外，也有一點或多點進行接種的。

3、穿刺接種

在保藏yanyang junzhong或研究微生物的動力時常采用此法。13-2012食品安全標準食品微生物學檢驗產氣莢膜梭菌檢驗GB4789。做穿刺接種時，用的接種工具是接種針。用的培養基一般是半固體培養基。它的做法是：用接種針蘸取少量的junzhong，沿半固體培養基中心向管底作直線穿刺，如某細菌具有鞭毛而能運動，則在穿刺線周圍能夠生長。

穿刺接種的兩種方法：垂直法和水平法

抑菌效力

接種大腸埃希菌、金黃色球菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養物至胰酪胨大豆肉湯培養基中，30～35℃培養18～24小時；接種白色的新鮮培養物至沙氏葡萄糖液體培養基中，20～25℃培養24～48小時。上述培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數為50～100cfu的菌懸液。③傾注法:取少許含菌材料放入無菌培養皿中，然后傾入已融化并已冷卻至48℃左右的瓊脂滅菌培養基，搖勻后冷卻凝固。接種黑曲霉的新鮮培養物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養基中，20～25℃培養5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜方法吸出孢子懸液至無菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數50～100cfu的孢子懸液。

微生物限度檢查

陰性對照

   為確認試驗條件是否符合要求，應進行陰性對照試驗，陰性對照試驗應無菌生長。如陰性對照有菌生長，應進行偏差調查。

   培養基適用性檢查

   微生物計數用的成品培養基、由脫水培養基或按chu方配制的培養基均應進行培養基適用性檢查。

   按表1規定，接種不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液體培養基管或胰酪大豆胨瓊脂培養基平板或沙氏葡萄糖瓊脂培養基平板，置表1規定條件下培養。每一試驗菌株平行制備2管或2個平皿。同時，用相應的對照培養基替代被檢培養基進行上述試驗。

   被檢固體培養基上的菌落平均數與對照培養基上的菌落平均數的比值應在0.5～2范圍內，且菌落形態大小應與對照培養基上的菌落一致；被檢液體培養基管與對照培養基管比較，試驗菌應生長良好。

4.供試品中微生物的回收

    微生物的回收可采用平皿法、薄膜過濾法或MPN法。

   （1）平皿法 平皿法包括傾注法和涂布法。表1中每株試驗菌每種培養基至少制備2個平皿，以算術均值作為計數結果。

   傾注法 取照上述“供試液的制備” “接種和稀釋”和“抗jun活性的去除或滅活” 制備的供試液1ml，置直徑90mm的無菌平皿中，注入15～20ml溫度不超過45℃熔化的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培養基，混勻，凝固，倒置培養。若使用直徑較大的平皿，培養基的用量應相應增加。將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養基上或活的生物體內的過程叫做接種。按表1規定條件培養、計數。同法測定供試品對照組及菌液對照組菌數。計算各試驗組的平均菌落數。

   涂布法 取15～20ml溫度不超過45℃的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培養基，注入直徑90mm的無菌平皿，凝固，制成平板，采用適宜的方法使培養基表面干燥。若使用直徑較大的平皿，培養基用量也應相應增加。——食品微生物項目背景——食源病原微生物引起的食源性疾病是食品安全的核心問題。每一平板表面接種上述照“供試液的制備” “接種和稀釋” 和“抗jun活性的去除或滅活”制備的供試液不少于0.1ml。按表1規定條件培養、計數。同法測定供試品對照組及菌液對照組菌數。計算各試驗組的平均菌落數。