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低溫生物菌種——菌種分離方法介紹

孢子分離又可分為以下幾種方法：

( 1 ）褶上涂抹法：選取新鮮、健壯、未開傘、未裂破的子實體，洗凈后用75 %酒精表面滅菌2 分鐘，然后連同培養基一起放入接種箱內，經熏蒸消毒12 ～ 24 小時，再按無菌操作技術將接種環在子實體菌褶上涂抹，把涂抹后帶孢子的接種環在培養基上劃線接種，，后置于25 ～ 28 ℃恒溫箱內培養，可得純菌種。

( 2 ）孢子印采集法：取滅過菌的載玻片、試紙或黑布，置于新鮮、未開傘或未開裂的子體菌褶的下方。經24 小時后，便落下孢子，形成印痕（即孢子印）。然后，用接種環或玻璃棒蘸取孢子，接種在平面或斜面培養基上，進行恒溫培養，可得純菌種。

( 3 ）孢子收集器采集法：孢子收集器由玻璃鐘罩、培養皿、三角架、搪瓷盤等組成。鐘罩下為一搪瓷盤，直徑25 厘米左右，盤內先墊襯4～6 層紗布，中央放1 副9 厘米直徑的培養皿，大蓋口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培養皿上放1 只鉛絲繞成的三角架，再將帶孔的玻璃鐘罩蓋上，頂上罩孔用棉塞塞好，用紗布包好整個孢子收集器，置于高壓滅菌鍋或蒸籠內滅菌2小時。

孢子收集器滅菌消毒后，放入無菌室或無菌箱內。然后，用小刀割取1 塊4～5 厘米大小的子實體，插在收集器內的三角架頂上（若無孢子收集器，也可用培養皿代替）。再置于溫度24 ～26 ℃下培養24 小時，培養皿中便可見到白色粉狀物，此即為孢子。此時，可將孢子收集器再移至接種箱內，取出培養皿，蓋好，并在培養皿內加入10 ～ 20 毫升的無菌水，使孢子散于本中，成為孢子懸浮液。然后，再用無菌打針筒或吸管吸取孢子懸浮液，接種于試管斜面培養基上，每管注2 ～ 3 滴。置于24 ～ 26 ℃溫度下培養5 ～ 7 天，培養基上便可長出白色菌落。待菌落直徑有0 . 5 厘米時，選健壯的菌落，再移接于另一試管的斜面培養基上培養。當白色菌絲長滿試管時，便得純菌種。

生物有機肥產品生產安全性分析

雖然目前生物有機肥產品生產大多采用植物根際促生菌， 但近年來很多研究發現，芽孢菌屬和類芽孢菌個別菌株能產生菌素。 即便在安全分級目錄中列為一級免做理學試驗的， 開展生物有機肥產品生產生物安全風險評價， 從源頭上把好安全關是產品質量安全的首要保障。通過調研發現， 用于生物有機肥產品的部分生產分類地位不明確， 甚至混亂， 難以從源頭上進行安全風險的初步識別 。 以常見生產枯草芽孢菌為例， 實際上是一個表型相似的群體， 包括枯草芽孢菌、 地衣芽孢菌、 短小芽孢菌、解淀粉芽孢菌、 深褐 （萎縮） 芽孢菌、莫哈韋（莫杰夫） 芽孢菌、 死谷芽孢菌、 索諾拉沙漠芽孢菌、 特基拉芽孢菌、暹羅芽孢菌等 10個緣種。生產企業送檢的枯草芽孢菌生物有機肥產品， 經鑒定發現很多產品實際為解淀粉芽孢菌， 且許多菌株具有很強的溶血作用。通過對生產企業調研發現， 部分生產企業選擇分離于動物腸道的解淀粉芽孢菌作為產品生產用菌株， 該類生產發酵周期短、 活菌數量高、 生產成本低， 但產品的應用功效不佳， 溶血風險大 ， 建議慎用。而植物來源的解淀粉芽孢菌溶血風險小， 產品應用效果好， 推薦使用。

微生物菌種有什么功效呢？

微生物肥料的功效是一種綜合性作用，一般不直接為農作物提供營養元素，主要起間接營養的作用，歸納起來主要有如下幾方面。

改良土壤結構

微生物還能分泌產生大量的胞外多糖類物質，如莢膜多糖、肽聚糖等。研究表明，這些有益微生物產生的糖類物質，占土壤有機質的0.1%，它們能與植物根系分泌物、土壤膠體等共同作用,形成土壤團粒結構。此外，它們還參與腐殖質形成，改善土壤理化性質。

改善作物品質

許多微生物肥料能改善作物品質。根瘤菌固定的氮素能輸往籽粒，使得豆科作物籽粒蛋白質含量提高。此外，一些蔬菜施用某些微生物肥料之后，能增加其中的維生素含量，降低葉菜類作物中的含量，提高果菜類作物中的糖分含量等。

低溫生物菌種的應用前景及發展趨勢

微生物在農業上的作用已逐漸被人們所認識。國際上已有70多個國家生產、應用和推廣微生物肥料。我國也有250家企業年產約數十萬噸微生物肥料應用于生產。這雖與同期化肥產量和用量不能相比，但確已開始在農業生產中發揮作用，取得了一定的經濟效益和社會效應，隨著相關研究的深入和市場需求的不斷擴大，微生物肥料生產已呈現出規模化工業生產模式。