內(nèi)蒙古獸藥殘留ELISA試劑盒價(jià)格多重優(yōu)惠「中檢維康」

發(fā)布時(shí)間：2021-09-01 08:24

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ELISA試劑盒的操作方法——雙夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌，下同）。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）。

3.　加酶標(biāo)：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“ ”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

Elisa試劑盒——Elisa實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

顯色淡，靈敏度偏低

1 試劑盒未充分平衡試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開(kāi)盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）

2 樣品不適合做ELISA檢測(cè) 樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測(cè)或者需要優(yōu)化檢測(cè)的條件（例如稀釋液的成分）

3 酶標(biāo)板在貯存或洗后拍干時(shí)過(guò)分干燥防止板過(guò)于干燥

4 包被遭到破壞操作溫和，移液槍不能碰到孔底

5 樣本和孵育條件不合適按照說(shuō)明書(shū)條件，建議孵育過(guò)程中全程振蕩孵育。

6 洗滌浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 按照說(shuō)明書(shū)操作。勿人為增加浸泡時(shí)間；

7 偶聯(lián)HRP試劑污染棄去試劑，重新配置

8 錯(cuò)誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑棄去試劑，重新配置

9 TMB底物孵育時(shí)間過(guò)短，因非人為因素影響，需要優(yōu)化孵育時(shí)間確定合適的孵育時(shí)間：人為判定-高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)深藍(lán)色；S4-5有淡藍(lán)色；機(jī)器判定620 nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值達(dá)到0.6-0.65

10 樣本濃度過(guò)高或存在基質(zhì)效應(yīng) 建議做不同稀釋倍數(shù)，確認(rèn)樣本稀釋倍數(shù)。

11 濾光片設(shè)置有問(wèn)題或者波長(zhǎng)選擇不對(duì) 確認(rèn)儀器設(shè)置及選擇正確的波長(zhǎng)檢測(cè)。

12 酶標(biāo)板不適合做ELISA 不能使用細(xì)胞培養(yǎng)板，建議使用ELISA高吸附力板子。