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低溫生物菌種——菌種分離方法

組織分離法

先將所需的藥用真菌采集回來，選取新鮮、個體大、壯實、中齡及無病蟲害的子實體（或菌核、菌索），作為分離用的材料。若為子實體，取其菌蓋或菌柄組織；若為菌核，取其全部或部分（如茯苓）菌核；若為菌索，取其部分根狀菌索（如蜜環菌）。再用75 %酒精進行表面消毒2 分鐘，用無菌水（或冷開水）沖洗數次，洗凈殘留的藥液后切成小塊。，然后，放入PDA 培養基的試管或培養皿上，置24 ～26℃溫度下，培養5 ～ 7 天。在分離的真菌組織周圍見長有白色菌絲時，應及時將菌絲移至斜面試管培養基上，再置溫度24 ～26 ℃下培養7～10 天，即得純菌種。所得的純菌種還可繼續擴大培養或保藏。

低溫生物通用工藝包

生物的產品在不同規模的小試和中試系統上進行過工藝開發與連續生產，已開發出在多種應用場景下利用吉態來生物微生物進行生產的通用工藝包。使用過的原料包括：合成氨弛放氣、焦爐煤氣、生物質氣化氣、鋼瓶氣和工業等。產出的產物包括：飼料蛋白原料（魚粉替代物）、生物油脂（脂肪酸）、生物柴油（脂肪酸甲酯）等大宗原料或產物，以及蛋白酶、DHA等高附加值產物。中試實現連續運行、穩定生產。該通用工藝包采用模塊化設計，其中模塊A為吉態來生物的產品，B/C/D為對應的發酵模塊、原料預處理模塊以及產物后處理模塊。工程企業可直接使用該工藝包進一步優化，或在此基礎上為業主提供工程項目的定制解決方案

低溫生物菌種的工藝介紹

現有生化工藝有活性污泥法、生物接觸氧化、MBBR、MBR等，這些工藝在常溫下均可實現氨氮的有效去除并達標，這時好氧系統中占主導地位的是中溫（微生物）硝化菌，硝化菌分自養硝化細菌和異樣硝化菌。

自養硝化菌生長繁殖緩慢，在活性污泥系統中無法與異養細菌競爭，難以維持較高的細胞濃度，需要保持較長的污泥停留時間來取得較好的脫氮效果，易受外界環境影響，對環境沖擊尤其是毒物沖擊非常敏感，硝化系統很容易崩潰，要經常不斷的馴化和培養。

低溫生物菌種——常用菌種介紹

側孢芽孢菌

在延遲期， 短芽孢菌為革蘭氏染色陰性，菌體呈細長的桿狀；在對數生長期，為革蘭氏染色陽性，菌體成短而粗的桿狀；在靜止期，革蘭氏染色又轉為陰性，菌體成細長的桿狀，偶爾也能觀察到橢圓形的芽孢。圖1是50號菌用1%H2SO4(pH6.8)負染后的電鏡照片：菌體桿狀、周生鞭毛、大小約0.88μm×2.2μm。

作為非脊椎動物的病原菌，有關研究人員曾報道了這種細菌的殺線蟲能力，由于所報道的這些側孢短芽孢菌菌株都不產生伴孢晶體，所以這些菌株的殺線蟲毒力因子并非來自于具有特征性的伴孢晶體。然而，Smirnova TA，et al.分離到了2株能形成大的伴孢晶體的側孢短芽孢菌菌株，這兩株菌顯示出很強的殺昆蟲能力，研究證實，這種能力與菌體在形成芽孢過程中的伴孢晶體相關。有趣的是，Singer的實驗表明，一株側孢短芽孢菌的殺線活性源于一個熱穩定蛋白的毒性。所有這些研究表明，不同側孢短芽孢菌菌株擁有不同的線蟲致病因子。牛秋紅研究小組分離到的側孢短芽孢菌G4菌株具有顯著的殺線蟲功能，但其并不產生伴孢晶體。從該菌株的發酵液里提取的粗蛋白酶液在12h內能殺掉所有測試線蟲并在24h內完全降解。從側孢短芽孢菌G4菌株中純化出的絲氨酸胞外蛋白酶可水解多種底物，包括膠原和線蟲體壁，具有很強的殺線蟲能力，組織病理電鏡實驗證實這種蛋白酶嚴重破壞了線蟲體壁。而且，蛋白酶將線蟲體壁分解成為一些氨基酸或小肽，這些營養物使病原細菌更好的生長繁殖。該蛋白酶基因異源表達的菌株表現出了明顯的殺線蟲活性，重組蛋白酶在體外對線蟲體壁降解，而蛋白酶缺失菌株喪失了大部分的殺線活性，死的線蟲在生測中保持了完整的體壁，表明蛋白酶在線蟲侵染中起主要作用。