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ELISA試劑盒的測定原理

測定技術的基礎在于抗原之間的特異結合反應，所以任何的診斷劑離不開好的原料，如抗原，酶等。以前用于測定的抗原通常為各種純化抗原，而則為純化抗原動物后獲得的多和使用雜交瘤技術得到的，而抗原或的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成方法制備。近年來，隨著分子生物學的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或及其酶結合物等測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。

ELISA試劑盒的制備方法

包括以下步驟：

1)抗原表位的計算機篩選；

2)抗原的制備；

3)采集；

4)間接ELISA方法的建立；

5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗證；

6)試劑盒的穩(wěn)定性驗證；

7)對屠宰場進行臨床檢測。該方法簡單、快速、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性合格、重復性好。應用本發(fā)明制得的試劑盒能有效檢出戊型病毒，適用于大批量發(fā)病樣本的檢測，可用于豬戊肝的快速診斷，并預防、控制豬戊病毒的流行和阻斷戊病毒由豬向人傳播。

ELISA試劑盒的試驗原理

試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)吸附實驗（ELISA）.已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。

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ELISA試劑盒——會出現(xiàn)的問題及解決辦法

吸光值均偏高(或線性不夠陡)。

a.原因：室溫太高(>25℃)。

解決辦法： 若無法降低室內溫度，請適當縮短步驟4的溫育時間。

b.原因：底物溶液受到污染。

解決辦法： 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍色，請不要再使用。

c.原因：反應時間超過太久。

解決辦法：請控制反應時間。

d.原因：酶標記物污染了盒內其它試劑。

解決辦法：使用過的吸頭應立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無殘留)