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發布時間：2021-09-02 09:15
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什么是試劑盒？
ELISA試劑盒在國內有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯試劑盒、酶聯吸附測定試劑盒、酶聯分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯吸附測定試劑盒等。
ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到全世界科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內生化領域的長足發展。
ELISA試劑盒的操作方法——雙夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“ ”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
Elisa試劑盒的注意事項
Elisa試劑盒是否滅活：加熱可滅清中補體系統，在較少數情況下（培養ES細胞，平滑肌細胞時）建議滅活，在培養其余細胞時不建議滅清。滅活非常容易產生沉淀，如必須滅活請按56℃，30 min，輕微搖晃原則操作，滅活溫度高、時間長、搖晃不均都容易產生沉淀。
Elisa試劑盒培養基：無培養基在結果重復性、細胞體外分化方面有優勢，但是，仍然是培養液中基本的添加物，尤其是在原代培養或細胞生長狀態不良時，常常會先使用有的培養液進行培養，待細胞生長旺盛后再換成培養液。
ELISA試劑盒主要實驗原理
·包被：抗原或者能以物理性吸附于固相載體表面，原因是蛋白質和聚乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，吸附之后能保持抗原反應等活性；
·標記：抗原或者可通過共價鍵與酶連接成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其活性和酶的催化特點；
·顯色：酶結合物與相應包被在固相載體的抗原或者結合后，也被固定在固相載體上，加入酶的底物之后可出現顯色反應，根據反應的顏色深淺可計算抗原或者的相對含量。
