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樣品如果溶解度太低如何上制備HPLC？

（1）了解一下樣品的性質,根據其酸堿性,極性等性質，通過調節溶劑的pH值等,以達到較好的溶解度。

（2）樣品可能某種晶型難溶，這樣可以加入其他溶劑以助溶。

（3）不是一定要用流動相來溶解樣品，對溶解度差的樣品，可以選擇甲醇，THF或DMSO等溶解樣品。特別是DMSO，對一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留，不會造成干擾。而且DMSO的洗脫能力很弱，一般不會影響峰型。

（4）可以固體上樣。

制備色譜之DAC如何次次裝出高柱效

動態軸向壓縮柱（Dynamic Axial Compression Column，DAC）是工業化制備液相色譜分離的重要組成部分。當用戶填裝直徑50mm以上制備柱時，傳統預裝柱很難裝出高柱效和對稱性，另外預裝柱使用過程柱頭容易塌陷，導致柱效變差，無法滿足長期持續純化生產。DAC在運行過程中，活塞可以提供持續壓力，保證很優的填裝柱床密度和穩定性，從而長時間保持很佳分離效果。相比于預裝柱或彈簧柱，DAC可以輕松填裝和拆卸，實現不同填料反復填裝和輕松切換。有人說大柱子不用考慮柱效和對稱性，只要能分出樣品就行?，F實是色譜就是靠柱效來分離的，柱效越高，分離越好，載量越大，收率和得率越高。

通常制備色譜方法開發在4.6mm，10mm或20mm的半制備柱，然后放大到DAC50或DAC100, DAC200，DAC300, DAC450, DAC600或DAC800。理論上多大規模的色譜柱都可以實現與分析柱或半制備柱同樣的效率，在現實中，設計優良的DAC柱效甚至高于預裝柱。只有柱效和對稱性類似才能保證了分離方法的線性放大。

制備色譜的填充

填料是工業制備色譜的血脈，填料的選擇和利用是非常關鍵的，目前已有越來越多的產品應用到IPC中。填料的化學性質和物理性質決定了色譜的分離性能和動力學性能。應用于大規模工業化制備色譜中的填料具有如下特殊的要求?！　?

1、機械強度高：填料需要承受很大的機械壓力，因為填料在IPC使用中，需要經常裝卸，機械性能差的填料經受不住反復填充，它們易破碎，產生細顆粒，降低柱滲透性，甚至堵塞濾片，造成流速分布不均勻，影響分離產物的純度，在系統中產生極高的柱壓而無法繼續使用引?！　?

2、負載量大：在IPC中，填料的負載量越大，則單位體質量填料可處理的原料量就可增加，因而提高了產率。選擇合適孔徑及孔徑分布的填料是獲得高負載量的一個關鍵因素。　　

3、可大量供應，批間的重現性好：制備色譜工藝過程要擴大，必須有可靠的供貨源提供大量填料，否則無法實現工業化。填料各批量之間的化學和機械穩定性、孔結構及可重復的比表面積等必須具有高度的重現性，否則難以保證長期、持續、穩定的分離與純化生產工藝?！　?

4、合適的顆粒大小和窄的粒度分布范圍：細顆?？稍黾铀鍞导胺直媛?，但同時引起裝柱困難，需要更高的操作壓力。

工業制備色譜

蛋白質的特點使得其分離過程與傳統化工分離過程有著極為不同的特點:(1)分離對象是具有特定的生物活性的生物大分子產品，分離過程設計中不恰當的物理和化學環境等(如溫度、PH值、緩沖液選擇、、攪拌和剪切力等)皆有可能引起其蛋白質分子結構發生改變，從而使之失活;(2)由于發酵液、細胞培養液或勻漿液中，我們所需要的目標產物往往存在于含有許多性質十分相似的雜質的稀溶液中，如何從這樣一種復雜的稀溶液中經濟有效地提取產物是生物分離技術面臨的重大課題;(3)從衛生和安全角度出發，對于用基因工程產品，有著極高的純度和同一性要求，對其中的有害雜質去除率要求極高，對分離設備材質和分離過程中引入的分離介質也有著嚴格的限制。