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發布時間:2020-11-03 05:17  
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應用:酵母雙雜交系統能在體內測定蛋白質的結合作用,具有高度敏感性。主要是由于:①采用高拷貝和強啟動子的表達載體使雜合蛋白過量表達。②信號測定是在自然平衡濃度條件下進行, 而如共沉淀等物理方法為達到此條件需進行多次洗滌,降低了信號強度。③雜交蛋白間穩定度可被結構域和結合結構域結合形成轉錄起始復合物而增強,后者又與啟動子DNA結合, 此三元復合體使其中各組分的結合趨于穩定。④通過mRNA產生多種穩定的酶使信號放大。同時, 酵母表型, X-Gal及HIS3蛋白表達等檢測方法均很敏感。酵母雙雜交就是基因轉錄所需的轉錄因子的兩個結構域在兩個互作蛋白的吸引下位置靠近,誘導了基因的表達。武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業從事生物醫學技術服務、技術咨詢及產品開發的生物技術服務企業。公司坐落于武漢光谷,由3位歸國博士領銜創辦。公司長期致力于建立并完善多項基礎生物技術服務平臺?,F憑借自身技術特色,依托光谷生物城技術產業優勢,面向全國提供的生物技術服務。其基本流程包括探針標記、探針的變性、樣本變性、雜交和熒光信號采集。
內源性酶滅活:如果探針的檢測是通過酶促法進行的,則樣品內相應的內源性酶必須被滅活。如內源性的POD可通過含1% H2O2的甲醛溶液處理30min。
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網上有很多關于FISH的實驗步驟教程,但每個探針盒子的操作可能存在差異。懂了原理,才能以不變應萬變。
FISH的大致步驟分為探針變性、標本變性、雜交、洗脫、雜交信號放大(適用于適用生物素標記的探針)、復染、封片、熒光顯微鏡觀察FISH結果。