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發(fā)布時間：2020-11-03 05:17
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應(yīng)用：酵母雙雜交系統(tǒng)能在體內(nèi)測定蛋白質(zhì)的結(jié)合作用，具有高度敏感性。主要是由于：①采用高拷貝和強(qiáng)啟動子的表達(dá)載體使雜合蛋白過量表達(dá)。②信號測定是在自然平衡濃度條件下進(jìn)行， 而如共沉淀等物理方法為達(dá)到此條件需進(jìn)行多次洗滌，降低了信號強(qiáng)度。③雜交蛋白間穩(wěn)定度可被結(jié)構(gòu)域和結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物而增強(qiáng)，后者又與啟動子DNA結(jié)合， 此三元復(fù)合體使其中各組分的結(jié)合趨于穩(wěn)定。④通過mRNA產(chǎn)生多種穩(wěn)定的酶使信號放大。同時， 酵母表型， X-Gal及HIS3蛋白表達(dá)等檢測方法均很敏感。酵母雙雜交就是基因轉(zhuǎn)錄所需的轉(zhuǎn)錄因子的兩個結(jié)構(gòu)域在兩個互作蛋白的吸引下位置靠近，誘導(dǎo)了基因的表達(dá)。武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業(yè)從事生物醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)、技術(shù)咨詢及產(chǎn)品開發(fā)的生物技術(shù)服務(wù)企業(yè)。公司坐落于武漢光谷，由3位歸國博士領(lǐng)銜創(chuàng)辦。公司長期致力于建立并完善多項(xiàng)基礎(chǔ)生物技術(shù)服務(wù)平臺。現(xiàn)憑借自身技術(shù)特色，依托光谷生物城技術(shù)產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢，面向全國提供的生物技術(shù)服務(wù)。其基本流程包括探針標(biāo)記、探針的變性、樣本變性、雜交和熒光信號采集。
內(nèi)源性酶滅活：如果探針的檢測是通過酶促法進(jìn)行的，則樣品內(nèi)相應(yīng)的內(nèi)源性酶必須被滅活。如內(nèi)源性的POD可通過含1% H2O2的甲醛溶液處理30min。
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網(wǎng)上有很多關(guān)于FISH的實(shí)驗(yàn)步驟教程，但每個探針盒子的操作可能存在差異。懂了原理，才能以不變應(yīng)萬變。
FISH的大致步驟分為探針變性、標(biāo)本變性、雜交、洗脫、雜交信號放大(適用于適用生物素標(biāo)記的探針)、復(fù)染、封片、熒光顯微鏡觀察FISH結(jié)果。
