流式細胞實驗常用解決方案,英瀚斯生物科技

骨sui內皮祖細胞的分離培養

方法:使用密度梯度離

心法汲差速貼壁法聯合的方法培養內皮祖細胞,在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況及形態變化，使用Dil標記的乙酰化低密度脂蛋白和FITC標記的荊豆凝集素1雙熒光染色、流式細胞儀檢測細胞表面抗原CD34、CD133 表達情況.結果與結論:培養前4 d細胞增殖不明顯第5~10天迅速增殖，并可見細胞集落及線狀結構形成培養第7天的內皮祖細胞具有吞噬Dil標記的乙酰化低密度脂蛋白和FITC標記的荊豆凝集素1的功能流式細胞儀檢測體外培養第十天的細胞,CD133 細胞占19.2%,CD34 細胞占28.7%,CD34 /CD133 細胞占19.1%.說明密度梯度離心法聯合差速貼壁法可在體外有效分離培養大鼠骨sui內皮祖細胞.

大鼠shen小球內皮細胞分離培養

2.原代細胞培養:(1)shen臟原位灌洗:SD大鼠用25%烏拉坦腹整注射麻zui后仰臥固定。4、脂質體5ul補培養基至50ul混勻靜止5分鐘(質粒與脂質體比例為1:2或1。胸腹部消森并分離胸主動脈,以無菌的冷Hank液漱朱洗血.同時剪破shen靜脈利于液體流出。1-2min后shen臟色澤變白,取出雙shen冰浴保存。

(2)shen小球分離:參照Green等方法改進。將灌洗后的shen臟撕下shen被膜.去除髓質后將皮質剪成約1-2mm'的碎塊，輕碾shen皮質依次通過80.120和200目鋼篩。收集shen小球。

(3)shen小球消化和培養；將提取的shen小球加人0.1% IN 型膠原酶消化后收集沉淀。這種摻入可以穩定存在，隨著DNA進入子細胞中BrdU特異性可以用于檢測BrdU的摻入，從而判斷細胞的增殖能力。以2x10* 的shen小球數接種于鋪有1%明膠培養瓶內,加A配制好的內皮細胞培養液(MFM.Hepes 20 mmnoVL 20%胎牛xue清0. 66 U胰島素/ml.血管內皮生長因子20 ng /ml、肝素鈉100 u/ml.青莓su100 U/ml、鏈霉su100 μ/ml) .靜止培養3 d后逐日觀察shen小球的貼壁情況。待shen小球充分貼壁后常規換液.第3同進行純化。

細胞分化

細胞分化是指同一來源的細胞逐漸產生出形態結構、功能特征各不相同的細胞類群的過程，其結果是在空間上細胞產生差異，在時間上同一細胞與其從前的狀態有所不同。5ml含不同濃度（104-106/ml）的細胞懸液，置37℃，5％CO2條件下孵育2-4h，棄掉培養液，PBS-T洗滌3次，每次3min。細胞分化的本質是基因組在時間和空間上的選擇性表達，通過不同基因表達的開啟或關閉，終產生標志性蛋白質。細胞誘導是指將一群不同類型或者形態結構、功能特征存在差異的細胞通過生物學、物理學等手段，將之轉變為具有相似/相同形態結構、功能特征的細胞群體的過程。