Small RNA提取試劑盒信賴推薦 友名生物

1.人ELISA試劑盒在測定時，受檢標本（測定其中的antibody或抗原）與固相載體表面的抗原或antibody起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原antibody復合物與液體中的其他物質分開。　　

2.再加入酶標記的抗原或antibody，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。　　

3.加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。　　

4.由于酶的催化效率很高，間接地放大了免1疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。ELISA可用于測定抗原，也可用于測定antibody。　　

5.然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個環節的質量保證才能充分發揮其方法學的優點。

傳統小分子特異性antibody制備技術

為解決小分子這類半抗原物質無法刺激宿主動物產生antibody的特性，必須將半抗原回復完全抗原的特性。解決這個問題可以通過將小分子和對宿主動物immune原性很強的物質：如OVA、BSA、KLH等偶聯，將其制備成完全抗原，通過immune宿主動物，便能促使宿主動物產生針對小分子的特異性antibody，這類antibody通過抗原特異性的篩選便能獲取目的antibody。目前，通過此項技術能解決絕大多數小分子特異性antibody的制備，但是也可能由于小分子的結構特異，偶聯物和偶聯方式的選取、偶聯率的差異以及immune技術有待發展等多方面的因素使其特異性antibody的制備存在困難。

PCR方法已廣泛用于科研，在工業中也有不斷擴大應用的趨勢，它包括檢測一些病原體、檢測支原體污染、檢測細菌污染以及檢測殘留宿主DNA等。

PCR在工業中的應用主要存在一個方法驗證的問題，尤其是靈敏度的驗證。靈敏度不夠，就會發生漏檢。另外，PCR所直接面對的樣本是DNA，而非病原菌或DNA，因此還需要做DNA抽提，這也是要注意的。

因此，如能采用PCR檢測支原體并替代藥典方法，還是能節省很多時間和精力。但PCR方法的驗證需要較為完整。靈敏度驗證是一個重要方面。靈敏度不夠，就會發生漏檢。《歐洲藥典》第2.6.7章（EP 2.6.7）和《日本藥典》第十七版第G3章（JP G3），都規定，對于核酸擴增法（如PCR）檢測支原體，如替代傳統的培養法，都要求檢測限達到10 CFU/ml。

具體驗證可使用10CFU的支原體靈敏度標準品，它一般為凍干粉形式，需要用待測樣本的樣本基質（需保證里面不含支原體）來復溶，再進行DNA抽提以及PCR檢測。如檢測的電泳有條帶，或者qPCR檢測后的Ct值小于40，即表明檢測成功。

在選用支原體PCR法檢測來替代藥典方法時，需要考慮如下兩個方面：

首先一步是要使用符合歐洲藥典要求，經過全方面驗證的支原體檢測試劑盒，第二部是自我驗證，即確認所用的樣本基質對于該試劑盒方法是合適的，并且操作過程是正確的。小規模的室內驗證通常需要采用三個不同批次的試劑盒，然后加入10CFU的標準品，做復孔（通常是8個復孔），并且至少選擇3個支原體物種進行驗證。

有的支原體標準品廠家會提供CFU與基因拷貝數的比值，以方便二者的換算。因為10CFU只能確定PCR能夠達到的檢測限在10CFU以下，但無法具體確定靈敏度的數值。帶DNA拷貝數標定的基因組DNA標準品則可進一步確定檢測限的數值。

總之，PCR方法很有用，但需要避免假陰性，驗證時應使用陽性對照、陰性對照、無模板對照和內控對照，以保證PCR反應正常，以及支原體少量存在時確實能檢出來，支原體不存在時也確保是結果陰性，從而使得PCR方法在工業應用時能確保zui終結果的可靠。