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發布時間：2021-07-30 04:47
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高效液相色譜
高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography ﹨ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術應用。
高效液相色譜的歷史
1903年俄國植物化學家茨維特（Tswett）初次提出“色譜法”（Chromatography）和“色譜圖”（Chromatogram）的概念。茨維特使用色譜法 chromatography （來自希臘字， chroma 意思是顏色， graphy 意思是記錄 - 直譯為顏色記錄）來描述他的彩色試驗。（令人好奇的是, 俄羅斯名字茨維特意思是顏色。）1930年以后，相繼出現了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術。1952年，英國學者Martin和Synge 基于他們在分配色譜方面的研究工作，提出了關于氣－液分配色譜的比較完整的理論和方法，把色譜技術向前推進了一大步，這是氣相色譜在此后的十多年間發展十分迅速的原因。1958年，基于Moore和Stein的工作，離子交換色譜的儀器化導致了氨基酸分析儀的出現，這是近代液相色譜的一個重要嘗試，但分離效率尚不理想。1960年中后期，氣相色譜理論和實踐發展，以及機械、光學、電子等技術上的進步，液相色譜又開始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學鍵合固定相用于液相色譜就出現了HPLC。1970年中期以后，微處理機技術用于液相色譜，進一步提高了儀器的自動化水平和分析精度。1990年以后，生物工程和生命科學在國際和國內的迅速發展，為高效液相色譜技術提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題，如人類基因組計劃，蛋白質組學有HPLC作預分離等。
HPLC對流動相的一般要求
流動相就比如人體的血液，其質量直接影響到整個系統的正常運行與否。
© 應該使用HPLC級的溶劑，不能互相混溶的溶劑不可以直接切換！
© 注意溶劑的截止波長。截止波長是指該溶劑可以在紫外檢測器中使用的很低波長,低于該波長后,溶劑會有很強的紫外吸收，從而影響極限的穩定性、干擾對所分析物質的檢測。
© HPLC所使用的水必須是新鮮的和經過0.45μm濾膜過濾過的。建議每天更換新鮮的水。長期不用時，必須把使用水的管路用有機的溶劑置換，防止長霉。
© 儀器使用完后要采用適當的溶劑沖洗等方法維護色譜柱和系統。如果使用了緩沖鹽一定先將鹽要沖洗干凈。
© 當有流路堵塞時，可以嘗試將之反接后沖洗。污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類生長將會縮短溶劑過濾器的使用壽命，并且影響泵和系統的的性能。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH 4 至7) 中尤其如此。
