北京液相色譜儀費用服務介紹「創新通恒」

如何用制備色譜柱制備低含量的雜質？

制備色譜柱為ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson餾分收集器，色譜儀為Agilent1100或LC-6A。想用其制備面積歸一化法含量為0.05%左右的雜質，初步提純后用高分辨的LC-MS進行定性分析。如何設定色譜條件，如，流量、進樣量、樣品的濃度、切割點的設置、是否要濃縮，要求將95%以上的主峰切除。

（主峰后有二個雜質靠得很近。）

答：

1.制備用的流動相盡量等級高一點，否則流動相中的雜質會影響LC-MS分析。

2.使用餾分收集器時，延遲體積一定要計算準確，檢測器的響應時間設到很小，否則都會影響收集的純度和回收率。制備柱的流速一般與直徑的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速為1mL/min，9.4mm制備柱用1*（9.4/4.6）2,大約為4mL/min。進樣量設到幾個mg應該基本沒有過載。進樣樣品濃度越高越好。假如進樣10mg，理論計算0.05%的雜質大約只有5μg，顯然濃度太低，盡量是多做幾次，合并餾分然后濃縮后做LC-MS分析。

同一種填料的分析柱、制備柱按線形放大公式套，分離度會不會變化？

一般會有一定的變化，原因有以下幾點：

（1）制備柱的裝填是否均勻，如不均勻則可能產生渦流擴散使各個組分的經過通道的直徑不同、阻力不一樣，停留時間不同，色譜峰可能變寬。

（2）如果樣品在流動相中溶解度小，在制備色譜上會有不同的峰展寬。

（3）如果樣品在分析柱上有展寬或拖尾的現象，放大到制備柱上后峰的展寬和拖尾經常會非常嚴重，導致分離失敗。

制備色譜之DAC如何次次裝出高柱效

動態軸向壓縮柱（Dynamic Axial Compression Column，DAC）是工業化制備液相色譜分離的重要組成部分。當用戶填裝直徑50mm以上制備柱時，傳統預裝柱很難裝出高柱效和對稱性，另外預裝柱使用過程柱頭容易塌陷，導致柱效變差，無法滿足長期持續純化生產。DAC在運行過程中，活塞可以提供持續壓力，保證很優的填裝柱床密度和穩定性，從而長時間保持很佳分離效果。相比于預裝柱或彈簧柱，DAC可以輕松填裝和拆卸，實現不同填料反復填裝和輕松切換。有人說大柱子不用考慮柱效和對稱性，只要能分出樣品就行。現實是色譜就是靠柱效來分離的，柱效越高，分離越好，載量越大，收率和得率越高。

通常制備色譜方法開發在4.6mm，10mm或20mm的半制備柱，然后放大到DAC50或DAC100, DAC200，DAC300, DAC450, DAC600或DAC800。理論上多大規模的色譜柱都可以實現與分析柱或半制備柱同樣的效率，在現實中，設計優良的DAC柱效甚至高于預裝柱。只有柱效和對稱性類似才能保證了分離方法的線性放大。

工業制備色譜

以重組DNA技術為標志的現代生物技術是當代高科技的核心之一,其發展將改變醫學農業、食品、能源、化學、環境等科學領域的傳統面貌，促進人類社會生產力和科學技術的巨大進步，通常，生物技術產品的分離、純化、直至得到符合需求的產品需要通過許多步驟才能實現。其中，吸附和液相色譜常常是其主要的、有時甚至是關鍵的分離技術之一。