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動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

高速冷凍離心機(jī)在所有的細(xì)胞離體培養(yǎng)中，困難的是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件。

⑴血1清：動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血1清。相對(duì)常用的是小牛血1清。血1清提供生長(zhǎng)必需因子，如激1素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。在這里，血1清等于是動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)的天然營(yíng)養(yǎng)液。

⑵支持物：大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞有貼壁生長(zhǎng)的習(xí)慣。離體培養(yǎng)常用玻璃，塑料等作為支持物。

⑶氣體交換：二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié)，不斷維持所需要的氣體條件。

經(jīng)過(guò)了近十多年既漫長(zhǎng)又短暫的發(fā)展，iPS細(xì)胞技術(shù)已經(jīng)取得了舉世矚目的進(jìn)展。一個(gè)個(gè)突破性的成果既給我們帶來(lái)了喜悅，也帶來(lái)了新的挑戰(zhàn)，細(xì)胞重編程有望迎來(lái)一個(gè)新的研究浪潮。盡管iPS細(xì)胞有著誘人的應(yīng)用前景，然而，未來(lái)iPS細(xì)胞的研究也面臨著許多亟需解決的問(wèn)題：

首先，效率問(wèn)題。目前，誘導(dǎo)產(chǎn)生iPS細(xì)胞的率仍然很低，這與基因?qū)说姆绞秸衔稽c(diǎn)、表觀遺傳學(xué)等多種因素有關(guān)。這已成為制約iPS從實(shí)驗(yàn)室走向臨床的zui大瓶頸。因此，如何提高iPS細(xì)胞的制備效率仍是人們普遍關(guān)注的問(wèn)題。

第二，安全性問(wèn)題。現(xiàn)在誘導(dǎo)iPS細(xì)胞通常借助逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體，將幾種癌基因轉(zhuǎn)入分化細(xì)胞誘導(dǎo)其成為iPS細(xì)胞，而這種方法就有可能會(huì)因?yàn)橥庠椿虿迦爰?xì)胞基因組，干擾了內(nèi)源基因的表達(dá)，從而誘發(fā)cancer。

細(xì)胞增殖是活1細(xì)胞的重要生理功能之一，是生物體的重要生命特征 ，是生物體生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖以及遺傳的基礎(chǔ)。細(xì)胞增殖是指細(xì)胞在周期調(diào)控的因子下，通過(guò)DNA copy等反應(yīng)，完成細(xì)胞分裂的過(guò)程。增殖檢測(cè)一般是分析分裂中的細(xì)胞數(shù)量的變化，進(jìn)而反應(yīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)及活性，細(xì)胞增殖檢測(cè)主要分為四類(lèi)：DNA合成檢測(cè)、代謝活性檢測(cè)、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測(cè)和ATP濃度檢測(cè)。

物質(zhì)跨膜運(yùn)輸?shù)姆绞椒譃楸粍?dòng)運(yùn)輸和主動(dòng)運(yùn)輸兩種。

（1）被動(dòng)運(yùn)輸，是順著膜兩側(cè)濃度梯度擴(kuò)散，即由高濃度向低濃度。分為自由擴(kuò)散和協(xié)助擴(kuò)散。

①自由擴(kuò)散：物質(zhì)通過(guò)簡(jiǎn)單的擴(kuò)散作用進(jìn)入細(xì)胞。細(xì)胞膜兩側(cè)的濃度差以及擴(kuò)散的物質(zhì)的性質(zhì)（如根據(jù)相似相溶原理，脂溶性物質(zhì)更容易進(jìn)出細(xì)胞）對(duì)自由擴(kuò)散的速率有影響，常見(jiàn)的能進(jìn)行自由擴(kuò)散的物質(zhì)有氧氣、二氧化碳、甘油、乙醇、苯、尿素、膽固醇、水、氨等。

②協(xié)助擴(kuò)散：進(jìn)出細(xì)胞的物質(zhì)借助載體蛋白擴(kuò)散。細(xì)胞膜兩側(cè)的濃度差以及載體的種類(lèi)和數(shù)目對(duì)協(xié)助擴(kuò)散的速率有影響。紅細(xì)胞吸收葡萄糖是依靠協(xié)助擴(kuò)散。

（2）主動(dòng)運(yùn)輸：物質(zhì)從低濃度一側(cè)運(yùn)輸?shù)礁邼舛纫粋?cè)，需要載體蛋白的協(xié)助，同時(shí)還需要消耗細(xì)胞內(nèi)化學(xué)反應(yīng)所釋放的能量。主動(dòng)運(yùn)輸保證了能夠按照生命活動(dòng)的需要，主動(dòng)選擇吸收所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，排出代謝廢物和對(duì)細(xì)胞有害的物質(zhì)。各種離子由低濃度到高濃度過(guò)膜都是依靠主動(dòng)運(yùn)輸。能進(jìn)行跨膜運(yùn)輸?shù)亩际请x子和小分子，當(dāng)大分子進(jìn)出細(xì)胞時(shí)，包裹大分子物質(zhì)的囊泡從細(xì)胞膜上分離或者與細(xì)胞膜融合（胞吞和胞吐），大分子不需跨膜便可進(jìn)出細(xì)胞。