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1、 ：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。2、 血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、 細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。



間接法1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；2.次日洗滌3次；3.加一定稀釋的待檢樣品（未知）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二（抗）0.1ml；5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；6.’后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙夾心法”的4、5、6。



蛋白質包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml。酶標記工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。